中文名稱:
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-EGFP/PI)
英文名稱:Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20 rxn
發(fā)貨周期:~3天
Annexin V-EGFP/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection Kit)是用EGFP標(biāo)記了的Annexin V作為探針,來(lái)檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的發(fā)生,可用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。
其檢測(cè)原理為:在正常的活細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine,PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在早期凋亡的細(xì)胞中,PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ(膜聯(lián)蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力結(jié)合?赏ㄟ^(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。
另外,本試劑盒中還提供了碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)用來(lái)區(qū)分存活的早期細(xì)胞和壞死或晚期凋亡細(xì)胞。PI是一種核酸染料,它不能透過(guò)正常細(xì)胞或早期凋亡細(xì)胞的完整的細(xì)胞膜,但可以透過(guò)凋亡晚期和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此,將Annexin V與PI聯(lián)合使用時(shí),PI 則被排除在活細(xì)胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡細(xì)胞(Annexin V+/PI-)之外,而晚期凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞同時(shí)被EGFP 和PI 結(jié)合染色呈現(xiàn)雙陽(yáng)性(Annexin V+/PI+)。
產(chǎn)品組份:
Annexin V-EGFP———————00 μl
PI Staining Solution————00 μl
×Binding Buffer——————8 ml
儲(chǔ)存條件:4℃,有效期一年。
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-EGFP/PI)注意事項(xiàng):
、懸浮細(xì)胞用此法時(shí)必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細(xì)胞數(shù)成比例,也受作用時(shí)間的影響,因此當(dāng)樣品較多時(shí)測(cè)定的OD 值可能隨時(shí)間而變。
3、MTT 溶液為黃色,需避光保存,長(zhǎng)時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí),請(qǐng)勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會(huì)凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
操作規(guī)程
、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000~0000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(完全培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×00
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)
Oleyloxyethyl Phosphorylcholine (0 mg) O9Zoctadecenylethyleneglycol2Ophosphorylcholine; Oleyloxyethyl Phosphorylcholine
Valproic acid sodium, Sodium Valproate, VPA Valproic Acid, Sodium Salt
Apelin (0 mg) LglutaminylLarginylLprolylLarginylLleucylLserylLhistidylLlysylglycylLprolylLmethionylLprolylLphenylalanine; Apelin
Nitrocefin (5 mg) Nitrocephin; (6R)3[(E)2(2,4dinitrophenyl)ethenyl]8oxo7R[(2thienylacetyl)amino]5thiaazabicyclo[4.2.0]oct2ene2carboxylic acid
Nimodipine (00 mg) ,4dihydro2,6dimethyl4(3nitrophenyl)3(2methoxyethyl) 5(methylethyl) ester, 3,5pyridinedicarboxylic acid; Admon|BAYe 96|Periplum; Nimodipine
U440 (50 mg) 9,dideoxy9α,αepoxymethano PGF2α|9,dideoxy9α,αepoxymethano Prostaglandin F2α|9,epoxymethano Prostaglandin H2, U440, 9,dideoxy9.alpha.,.alpha.epoxymethanoprosta5Z,Edienoic acid
wo7iumtaurodeoxycholat牛磺脫氧膽酸鈉5克BR,99%
33223對(duì)二二聚體[2.2]Paracyclophane
LCYSTEINExy7noCHLORIDE,MONOHYDRATEL半胱酸鹽酸鹽,一水高級(jí)白色精細(xì)結(jié)晶粉末RTsigma
鳥(niǎo)苷3',5'環(huán)... Guanosine 3′,5′cyclic monophosphate... 7 25MG 通用試劑
本加醋己酯 ≥98% Hqxyl bqnzoctq 89884
litxiummetaborateoctahydrate偏硼酸25克4N,00200目,99.99%
44306茜素紫3BACID VIOLET 43
Propylacetate正酯2.5升AR,99.8%
5硝基香蘭素 5Nitrovanillin,97% 6635207 5G 通用試劑
銦/Indium sulfate CP,99% 5克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
小鼠原肌球調(diào)節(jié)蛋白3(TMOD3)ELISA試劑盒 ,英文名: TMOD3 ELISA Kit
猴載脂蛋白A(apo-A)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyapoproteinA,apo-AELISAKit 96T/48T
犬基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/Gelatinase A)免疫試劑盒 Canine Maix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA kit
英文名稱HumanangiotensinogenELISAKit人血管緊張素原(aGT)規(guī)格:96T/48T
化線粒體損傷/氧化(NAO)熒光測(cè)定試劑盒20/200次
RatIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA試劑盒大鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素2(IL2)ELISA試劑盒 ,英文名: IL2 ELISA Kit
人抵抗素(Resistin)ELISA檢測(cè)試劑盒humaesistinELISAKIT 96T/48T
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V-EGFP/PI)大鼠抗IgE受體抗體免疫試劑盒 Rat ai-IgE receptor aibody ELISA Kit
英文名稱RatPyriLinksELISAKit大鼠吩(PyriLinks)規(guī)格:96T/48T
酒類尿素比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitHLAMP-2人溶酶體相關(guān)膜蛋白2規(guī)格:48T/96T
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