以下是細胞生物學(xué)試劑詳細說明:
細胞凋亡檢測試劑盒III(FITC)保存條件:-20℃冰凍保存一年。
工作原理:
在機體內(nèi)部隨時都在發(fā)生著細胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與 DNA 斷點數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將地高辛標記的dUTP(DIG-dUTP)標記至 3’-OH 末端,DIG-dUTP 結(jié)合在 DNA 斷點部位,可以通過生物標記的抗地高辛抗體(Anti-DIG-Biotin)反應(yīng)后,再結(jié)合鏈酶親和素-熒光素 FITC(SABC-FITC)。FITC 在 490-495nm 激化,在 520-530nm 發(fā)射熒光,呈黃綠色。凋亡的細包核呈黃綠色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。
試劑盒內(nèi)容:
.標記緩沖液(Labeling Buffer)ml
2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl
3.DIG-dUTP(×20)20μl
4.封閉液(Blocking Reagent)4ml
5.生物素化抗地高辛抗體(× 00)20μl
6.SABC-FITC(× 00)20μl
7.Proteinase K(×200)50μl
8.抗體稀釋液 4ml
注意事項
. 微量試劑取用前請離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿防護服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05,,不推薦用于檢測組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細胞。如果是貼壁細胞,建議適用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不當,可能引起假陽性,而用細胞刮子會造成細胞粘連成團,而影響檢測。可將胰酶消化后細胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止進一步的損傷。
6. 細胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅,請不要固定樣品。
7. 因檢測細胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同,因而流式檢測的熒光補償也不同,因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細胞作為對照,進行熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點:
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好?朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨特的溶膠液/結(jié)合液配方,將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一,因此一個試劑盒可以運用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況,節(jié)省了需購買多種試劑盒的費用,
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達到最佳結(jié)合效果,大大提高回收效率。
5.改進的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性,即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。
PA Assay DMSO ( ml) PA Assay DMSO
酸 Valproic Acid (0。5 g)
4Methylbenzamide oxime (500 mg) Nhydroxy4methylbenzenecarboximidamide; pToylamideoxime; 4Methylbenzamide oxime
CAY08 (0 mg) N
G36 ( mg) (4S)rel4(6bromo,3benzodioxol5yl)3aR,4,5,9bStetrahydro8(methylethyl)3Hcyclopenta[c]quinoline; G36
MicrocystinLR ( mg) CyanoginosinLR, MicrocystinLR, Toxin T (Microcystis aeruginosa)
PROTEASEINHIBCKTL,GENERALW/EDTA通用蛋白酶抑制劑混合物,含EDTA蛋白組學(xué)級MLFrozen
2023N甲基L纈酸HMEVALOH HCL
本扎錄,英文名或英文縮寫:HDBAC,級別:IND,規(guī)格:25克
雌摸司汀鱗醋內(nèi) (bqtc)qstrc,3,5(0)triqnq3,diol 3(bis(2chloroqthyl)ccrbcmctq) (dixy7nogqnphosphctq) diwo7ium sclt 2029
申醋 LqcD(II) cRSqNcTq 3
GlyProAMC甘酸脯酸7基4三扶甲基0克特定級
60DL高半胱酸硫內(nèi)酯鹽酸鹽DLHomocysteinethiolactone xy7nochloride
LMINEL甲(蛋酸)美國藥典級白色至米白色粉末COLDsigma
3氧基酚;3羌基茴香迷;間羌基本迷;間氧基酚;間本二酚一迷;羌基3氧基本 3Mqthoxyphqnol;MMqthoxyphqnol;Rqsorcinol MonoMqthyl qtqr;xy7noxy3Mqthoxybqnzqnq 0
wo7iumcaonaTE碳酸鈉,無水試劑級白色精細粉末RTsigma
小鼠載脂蛋白F(APOF)ELISA試劑盒 ,英文名: APOF ELISA Kit
猴E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA檢測試劑盒MonkeyE-SelectinELISAkit 96T/48T
犬結(jié)蛋白(Des)免疫試劑盒 Dog desmin,Des ELISA Kit
英文名稱HumanSerumamyloidAELISAKit人血清淀粉樣蛋白A(SAA)規(guī)格:96T/48T
化線粒體凍存液(生物能量學(xué)保護)50毫升
RatInsulin-likegrowthfactorbindingprotein,IGFBP-ELISA試劑盒大鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白(IGFBP-)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠白介素δ(FILδ)ELISA試劑盒 ,英文名: FILδ ELISA Kit
人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA檢測試劑盒humahyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit 96T/48T
大鼠巨噬細胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子(AmAC-)免疫試劑盒 Rat Alternative macrophage activation-associated CC chemokine ,AMAC- ELISA Kit
英文名稱RatGamma-aminobyricacidELISAKit大鼠γ氨基(GABA)規(guī)格:96T/48T
聚烯酰胺凝膠粉碎法膠回收試劑盒20次
ELISAKitHSPgp96人熱休克蛋白糖蛋白96規(guī)格:48T/96T
細胞凋亡檢測試劑盒III(FITC)操作步驟:
、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的 完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。000~2000g 離心 min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
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