中文名稱：Hoechst 33342/PI雙染試劑盒
英文名稱：Hoechst 33342/PI Double Stain Kit
產(chǎn)品規(guī)格：00T
發(fā)貨周期：～3天
Hoechst 33342/PI雙染試劑盒Hoechst 33342/PI 雙染試劑盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）雙染的方法以區(qū)分凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的試劑盒。其檢測(cè)原理是：細(xì)胞核熒光染料Hoechst 33342可以穿透細(xì)胞膜，嵌入雙鏈DNA后釋放藍(lán)色熒光。對(duì)于正常細(xì)胞，其可少許進(jìn)入細(xì)胞膜使其染上低藍(lán)色。而凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)，從而使得進(jìn)入凋亡細(xì)胞內(nèi)的Hoechst 33342明顯多于正常細(xì)胞，熒光強(qiáng)度比正常細(xì)胞要高。另外，細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)染色質(zhì)會(huì)固縮，從而使得染料能更有效和聚集的結(jié)合于DNA，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受損而不能有效的將Hoechst 33342排除到細(xì)胞外使其在細(xì)胞內(nèi)的積累增加，這些特征都使得凋亡細(xì)胞經(jīng)染色后熒光會(huì)比正常細(xì)胞明顯增強(qiáng)。但細(xì)胞核熒光染料PI不能穿透細(xì)胞膜完整的正常細(xì)胞或凋亡細(xì)胞，即活細(xì)胞對(duì)PI染料拒染。而對(duì)于壞死細(xì)胞，其細(xì)胞膜的完整性在早期即已喪失，可被PI染色。
經(jīng)上述兩種染料雙染后，使用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡檢測(cè)時(shí)，正常細(xì)胞為弱紅色熒光＋弱藍(lán)色熒光，凋亡細(xì)胞為弱紅色熒光＋強(qiáng)藍(lán)色熒光，壞死細(xì)胞為強(qiáng)紅色熒光＋弱藍(lán)色熒光。
本試劑盒染色快速方便，可用一步法或者兩步法進(jìn)行染色。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，無需稀釋等配制過程，也無需再準(zhǔn)備其它任何溶液。本試劑盒足夠檢測(cè)00個(gè)樣品，每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可達(dá)05-06個(gè)。
注意事項(xiàng)
) Hoechst 33342、PI對(duì)人體有害，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)；
2) Hoechst 33342、PI需避光，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程盡量避光操作；
3) 熒光染料均存在淬滅情況，建議染色后需盡快檢測(cè)；
4) Hoechst 33342 與細(xì)胞孵育時(shí)間不宜過長(zhǎng)，一般控制在20min以內(nèi)。太長(zhǎng)容易引起該染料的發(fā)射光譜由藍(lán)光向紅光遷移，導(dǎo)致紅色熒光和藍(lán)色熒光比例改變。
5) 如果用于組織樣品檢測(cè)，則必須把組織消化制備成單細(xì)胞懸浮液后才可以進(jìn)行檢測(cè)。
6) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2個(gè)月

注意事項(xiàng)：
、懸浮細(xì)胞用此法時(shí)必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細(xì)胞數(shù)成比例，也受作用時(shí)間的影響，因此當(dāng)樣品較多時(shí)測(cè)定的OD 值可能隨時(shí)間而變。
3、MTT 溶液為黃色，需避光保存，長(zhǎng)時(shí)間光照會(huì)導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會(huì)凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
PAF Cd4 （00 ug）     Ohexadecyl（7，7，8，8d4）2Oacetylsnglyceryl3phosphorylcholine； Plateletactivating Factor Cd4； PAF Cd4
ABCHMINACA metabolite M5A （ mg）     （（4hydroxycyclohexyl）methyl）Hindazole3carboxylic acid
Resorufin betaDgalactopyranoside     Resorufin betaDgalactopyranoside
 Degradant Npentanoic acid metabolite （5 mg）     5（3（3，3，4trimethylpent4enoyl）Hindolyl）pentanoic acid；  Degradant Npentanoic acid metabolite
0（E），（Z）Conjugated Linoleic Acid （00 mg）     0E，Zoctadecadienoic acid； 0E，ZCLA； 0（E），（Z）Conjugated Linoleic Acid
N（7cyano6（4fluoro3（2（3（trifluoromethyl）phenyl）acetamido）phenoxy）benzo[d]thiazol2yl）cyclopropanecarboxamide     TAK632
2脫氧D葡萄糖shēng huà shì jì容量：RT25克
UDPG 25mg/00mg/250mg/g Sigma U25
桔汁瓊脂25毫升
4炔基N,N二基本安 4'DIMqTHYLcMINOPHqNYL cCqTYLqNq 23
代辛烷克
Balofloxacin巴羅沙星50毫克組織培養(yǎng)級(jí)，γ射線滅菌
905325四代熒光素ERYTHROSIN B
4(Aminometxyl)thiopxene2carbonitnile 2307
棕櫚酸異酯 Isopropyl palmitate,90% 2 00ML 通用試劑
L乳醋脫輕酶(+4℃) Nc
小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒 ，英文名： MUC7 ELISA Kit
小鼠β2糖蛋白抗體IgA/G/M(β2-GPIgA/G/M)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseβ2-glycoproteinaibodyIgA/G/M,β2-GPIgA/G/MELISAKit 96T/48T
人巨噬細(xì)胞刺激蛋白(MSP)免疫試劑盒 Human MSP ELISA Kit
RatAmylinELISAKit大鼠胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細(xì)胞鈣ATP酶SERCA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒0/20次
Mouseacetylcholine,ACHELISA試劑盒小鼠乙酰膽堿(ACH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠白介素8(IL8)ELISA試劑盒 ，英文名： IL8 ELISA Kit
人前列腺素E(PGE)ELISA檢測(cè)試劑盒humanProstaglandinE,PG-EELISAKit 96T/48T
大鼠精氨酸加壓素受體A(AVPRA)免疫試劑盒 Rat Vasopressin Va receptor,AVPRA ELISA kit
英文名稱RatBeta-EndorphinELISAKit大鼠β-內(nèi)啡肽(Beta-Endorphin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
聚乙二醇沉淀法DNA清潔試劑盒20次
ELISAKitHSP-27人熱休克蛋白27規(guī)格：48T/96T
Hoechst 33342/PI雙染試劑盒操作規(guī)程
、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000～0000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
 a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×00
 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)

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