以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說(shuō)明：

中文名稱	Ki67細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)
英文名稱	Ki67 cell proliferation Detection Kit
規(guī)格	20T

Ki67細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)Ki67 蛋白是細(xì)胞周期相關(guān)的一種核蛋白，主要表達(dá)于細(xì)胞增殖分裂的各個(gè)時(shí)期（G、S、G2 和M 期），但是在靜息的細(xì)胞（G0 期）中不表達(dá)。Ki67 常用于檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)指數(shù)（免疫組化法利用計(jì)算細(xì)胞總數(shù)中的Ki67 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例得到Ki67 指數(shù)）。
Ki67 通常通過(guò)標(biāo)記抗Ki67 的抗體（FITC 綠色熒光）和DNA 染料碘化丙啶（PI，紅色）而利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞周期的檢測(cè)。
操作方法
. 在最適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。
2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。
3. 胰蛋白酶處理和收集細(xì)胞，離心，（注意）保證每管細(xì)胞數(shù)在06 個(gè)。
4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的00%乙醇。用 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少h。（注意2）
5. 沉淀細(xì)胞，完全吸去上清。
6. 用50 μl PBS/ % BSA 洗細(xì)胞2 次。
7. 用00μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/%BSA/PBS）重懸細(xì)胞，加入ul Ki67 抗體(μg/06 cells)，室溫孵育 小時(shí)。
8. 離心收集細(xì)胞，用50μl% BSA-PBS 洗2 次。
9. 離心收集細(xì)胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加μl (.5μg/06 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞，50μl PBS/ % BSA 洗2 次。
0. 用含有終濃度為0 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細(xì)胞。
. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細(xì)胞，50μl PBS/ % BSA 洗2 次后，轉(zhuǎn)移至流式檢測(cè)管中重懸。
2. FACS 檢測(cè)或者儲(chǔ)存于4℃。


注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽(yáng)性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測(cè)細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購(gòu)買多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

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