以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑詳細(xì)說明：

中文名稱	細(xì)胞凋亡DNA Ladder檢測(cè)試劑盒
英文名稱	Cell Apotosis DNA Ladder Detection Kit
規(guī)格	20T|50T|00T

細(xì)胞凋亡DNA Ladder檢測(cè)試劑盒本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測(cè)（不推薦用于檢測(cè)組織樣本）。細(xì)胞核染色質(zhì)DNA 斷裂是細(xì)胞凋亡的標(biāo)志特征。在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，核酸內(nèi)切酶被激活，選擇性降解染色質(zhì)DNA，形成50-300 kb 的大片段，并進(jìn)而在核小體連接處斷裂，形成80-200 bp 或其整倍數(shù)的DNA片段，這些DNA 片段可從細(xì)胞中提取出來，通過瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙啶染色呈現(xiàn)為梯狀條帶（DNALadder），并據(jù)此判斷細(xì)胞凋亡產(chǎn)生。我司細(xì)胞凋亡DNA Ladder 檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)便、快速地提取染色質(zhì)DNA 的方法，并增加對(duì)小片段DNA 的回收，從而增強(qiáng)了檢測(cè)的敏感性。
注意事項(xiàng)
. DNA Ladder 出現(xiàn)在細(xì)胞凋亡晚期，觀察細(xì)胞形態(tài)已發(fā)生皺縮出芽，染色質(zhì)完全凝聚，細(xì)胞核已固縮斷裂的凋亡晚期形態(tài)，建議該種形態(tài)的凋亡細(xì)胞比例在30%以上時(shí)進(jìn)行DNA Ladder 檢測(cè)或先進(jìn)行Tunel檢測(cè).
2. DNA Ladder 出現(xiàn)在一個(gè)較短的時(shí)間段，在凋亡早期取樣，則無DNA 降解的條帶，而在凋亡末期取樣則產(chǎn)生與細(xì)胞壞死相似的DNA 彌散條芾。因此取樣時(shí)間需根椐不同種類的細(xì)胞和誘導(dǎo)劑而摸索確定。
3. 貼壁細(xì)胞最好不用胰酶消化而用細(xì)胞刮收集。
4. 某些細(xì)胞不產(chǎn)生這種核小體間的DNA 斷裂，而是產(chǎn)生50-300kb 的大片段斷裂。


注意事項(xiàng)
. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物，操作時(shí)請(qǐng)采取防護(hù)措施，穿防護(hù)服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，建議適用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽(yáng)性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)�？蓪⒁让赶�化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
6. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
7. 因檢測(cè)細(xì)胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界著名公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液，不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方，將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一，因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況，節(jié)省了需購(gòu)買多種試劑盒的費(fèi)用，
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于觀察溶膠效果和監(jiān)測(cè)pH值變化從而達(dá)到最佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。
5.改進(jìn)的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性，即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。 、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的  完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落， 直接用胰酶細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。000～2000g 離心 min，沉淀細(xì)胞，盡量去除胰酶細(xì)胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

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