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Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒
英文名稱:總訪問:105
國產(chǎn)/進口:國產(chǎn)半年訪問:13
產(chǎn)地/品牌:莼試產(chǎn)品類別:細胞生物學試劑
規(guī)       格:100T|50T 最后更新:2024-11-13
貨       號:CS-6076
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中文名稱:Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:00T|50T
發(fā)貨周期:~3天
凋亡早期的重要特征之一是半胱氨酸特異性蛋白酶——caspase家族蛋白的活性激活。這一類酶可以參與到一系列的生化反應中,響應凋亡早期信號并導致相應的蛋白底物剪切,繼而引發(fā)細胞解體。目的底物可識別的序列包含天門冬氨酸殘基,剪切發(fā)生在序列的羰基段。
Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒采用新型的熒光底物為原料,可以檢測凋亡細胞中激活的caspase3/7.這種具有膜親和型的檢測試劑盒由一個4氨基的小肽(DEVD)和一種核酸結合染料。凋亡發(fā)生時,caspase3/7蛋白被激活,從而剪切caspase3/7識別序列DEVD肽段。剪切底物后,游離的核酸染料與DNA結合,從而發(fā)出亮綠色熒光信號。
操作步驟
. 以合適的培養(yǎng)基懸浮細胞或貼壁細胞,加入合適的化合物或藥物,刺激細胞誘導凋亡。
.2 去除藥物或化合物,以新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞2-3次,更換新鮮培養(yǎng)基后,以μL/mL的量加入caspase3/7檢測液,使得caspase3/7檢測試劑工作液濃度為μM。(注意: Caspase3/7 檢測試劑工作液濃度為0.5μM~2μM,您根據(jù)細胞量以及培養(yǎng)液的體積進行調(diào)整優(yōu)化。)
.3 37℃,避光孵育30min,或室溫孵育45-60min。
.4 熒光顯微鏡觀察拍照或熒光光度計讀數(shù)。


Caspase3/7活細胞熒光實時法檢測試劑盒注意事項:
、懸浮細胞用此法時必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細胞數(shù)成比例,也受作用時間的影響,因此當樣品較多時測定的OD 值可能隨時間而變。
3、MTT 溶液為黃色,需避光保存,長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時,請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
操作規(guī)程
、在96孔板加入細胞00μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入00微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入00微升5000~0000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及00%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(完全培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×00
 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時的藥物濃度(IC90)
pNPP Tablets (25 ea)     paraNitrophenyl Phosphate Tablets; pNPP Tablets
Palmitic Acidd3 (500 mg)     hexadecanoic2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,0,0,,,,,,,,,,,,,d3 acid
Cyanine 7 [相當于Cy7]     Cyanine 7 hydrazide [equivalent to Cy7 hydrazide]
Amiodarone (hydrochloride) (5 g)     (2butyl3benzofuranyl)[4[2(diethylamino)ethoxy]3,5diiodophenyl]methanone, monohydrochloride; Cordarex|Pacerone ; Amiodarone (hydrochloride)
Docosahexaenoic Acid ethyl ester ( g)     2,4,6,8,0,docosahexaenoic acid, ethyl ester; Cervonic Acid ethyl ester|DHA ethyl ester; Docosahexaenoic Acid ethyl ester
[(4R,5S)5[(2Aminoethyl)amino]N2(0,dimethyloxotetradecyl)4hydroxyLornithine]5[(3R)3hydroxyLornithine]pneumocandin B0; L ; MK 09)     Caspofungin acetate
BES,FREEACIDBES蛋白組學級白色結晶粉末RTsigma
56L絲酸;;;Lβ羥基LSerine;Lβxy7noxyalanine;(S)2AMino3xy7noxypropionic acid;(S)(+)Serine;L3xy7noxyαalanine;Ser;S
SaikosaponinB柴胡皂甙B00克BR,粘度200 mpe.s
N.N二基.3炳二安 3Diqthylcminopropylcminq 089
ProcyanidinB2原矢車菊素B2500ulAR,99%
CACODYLICACID,FREEACID二甲超級白色結晶粉末RT不sigma
333(癸基二甲基銨)磺酸內(nèi)鹽3(Decyldimetxylazaniumyl)propanesulfonate
M肉湯0毫升
丁基3甲基咪唑... BMIMBF4,≥98.5% 056 5G 通用試劑
瑞香素 Daphnetin (≥98%,HPLC) 20328 20MG 標準品
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