Caspase 3熒光法檢測試劑盒(AFC)本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織caspase-3 檢測。Caspase 家族在介導(dǎo)細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中caspase-3 為關(guān)鍵的執(zhí)行分子,與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-3 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細胞發(fā)生凋亡階段,它被激活,活化的Caspase-3 由兩個大亞基和兩個小亞基組成,裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,最終導(dǎo)致細胞凋亡。Caspase-3 熒光檢測試劑盒就是將caspase-3 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團。當(dāng)?shù)孜锉籆aspase-3 剪切后,發(fā)色基團即游離出來,可通過熒光酶標(biāo)儀測定其熒光強度(激發(fā)波長=485nm,發(fā)射波長=535nm)。
注意事項
. Caspase-3 Substrate 避光保存及使用。
2. 對某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-3 活化的機制,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-3 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。
3. 細胞數(shù)量需達到3~5×06 個或新鮮組織50~00mg,以便能達到測定需要的00~200μg 蛋白的要求,因為Caspase-3 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測定的RFU 值偏低,可以通過適當(dāng)延長反應(yīng)的時間,如果值還是不高,可通過增加細胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。
以下是細胞生物學(xué)試劑詳細說明:
注意事項
. 微量試劑取用前請離心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 為潛在致癌物,操作時請采取防護措施,穿防護服、戴手套等。
4. 本試劑盒適用于檢測活細胞,流式細胞儀檢測時,細胞數(shù)量不以應(yīng)低于×05,,不推薦用于檢測組織樣本。
5. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細胞。如果是貼壁細胞,建議適用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不當(dāng),可能引起假陽性,而用細胞刮子會造成細胞粘連成團,而影響檢測?蓪⒁让赶蠹毎谋4嬖诤2%BSA 的PBS 中,防止進一步的損傷。
6. 細胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅,請不要固定樣品。
7. 因檢測細胞的類型、凋亡誘導(dǎo)劑種類、使用的檢測儀器不同,因而流式檢測的熒光補償也不同,因此建議每次檢測均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細胞作為對照,進行熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)。
產(chǎn)品特點:
.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界著名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好?朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了優(yōu)質(zhì)溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨特的溶膠液/結(jié)合液配方,將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一,因此一個試劑盒可以運用于瓊脂糖DNA回收、PCR產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況,節(jié)省了需購買多種試劑盒的費用,
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測pH值變化從而達到最佳結(jié)合效果,大大提高回收效率。
5.改進的溶膠液配方,大大提高了緩沖能力和穩(wěn)定性,即使樣品變化很大也能將PH緩沖在最佳結(jié)合范圍內(nèi)。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑,也不需要乙醇沉淀。
操作步驟:
、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的 完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。000~2000g 離心 min,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
Potassium Phosphate Buffer (500 mM; pH 6。5) (5 ml) Potassium Phosphate Buffer (500 mM; pH 6。5)
SRT 20 (0 mg) CAY0559|SIRT ; N[2[3(piperazinylmethyl)imidazo[2,b]thiazol6yl]phenyl]2quinoxalinecarboxamide
Daidzin (50 mg) 7(βDglucopyranosyloxy)3(4hydroxyphenyl)4Hbenzopyran4one; Daidzoside| NPI 03D; Daidzin
Neutrophil Elastase Inhibitor (25 mg) (3methylbenzoyl)Hindazole3carbonitrile
AM4 Npentanoic acid metabolite (0 mg) 5(3(2iodobenzoyl)Hindolyl)pentanoic acid; AM4 Npentanoic acid metabolite
DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 3.5 kDa DiaEasy Dialyzer (800 ul) MWCO 3.5 kDa
DEPURINATIONSOLUTION去嘌呤溶液生物技術(shù)級2LRT
L(+4℃)(劇毒)L()epinepxnine
吲哚3乙酸,英文名或英文縮寫:IUPAC,級別:USP級,%,規(guī)格:克
(2羌基)咪坐 (2xy7noxyqthyl)imidczolq
三拂磺醋 McGNqSIUM TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 608
GENEPAGEPLUS6%*CLDPAK*6% GENEPAGE PLUS, 7 M 尿素生物技術(shù)級00MLCOLD
334硫堇;勞氏青蓮;勞氏紫;錄化3,7二基吩噻嗪Thionin;Thionine;Thionine chloride;3,7DiaMinopxenothiazin5iuM chloride;7AMino3iMino3Hpxenothi xy7nochloride;C.I. 52000
5′UDP,2Na尿苷5′二嶙酸二鈉鹽5000UBR,0u/mg
乙酰錳 Manganese(III)acetylate 2890 25G 通用試劑
苯 Chlorophenylethane,98% 2 25ML 通用試劑
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)ELISA試劑盒 ,英文名: TGF-β ELISA Kit
小鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA檢測試劑盒MouseGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 96T/48T
人抗TNF-α自身抗體免疫試劑盒 Human ai-TNF-alpha aoaibody ELISA kit
RabbitvonWillebrandFactor,VWFELISAKit兔血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細胞IKB-ALPHA蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒0/20次
Humanβ-subunitsofhemoglobin,HB-βELISA試劑盒人血紅蛋白β亞基(HB-β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠β細胞素(BTC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
The ace of ansferrin (MTF) ELISA Kit 人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒
Humanbonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit 人骨形成蛋白(BMPs)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Caspase 3熒光法檢測試劑盒(AFC)HumanCC-chemokinereceptor,CCRELISA試劑盒人CC趨化因子受體(CCR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因玉米CBH35(starlink)品系試劑盒20次
humanserumdeprivatioesponse,SDPRELISAKit人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白(SDPR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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公司著力立足于生命科學(xué)領(lǐng)域,全力打造品質(zhì)生物科技產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈!