中文名稱：細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒
英文名稱：Cell Cycle and Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格：50次
發(fā)貨周期：～3天
細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡分析的檢測試劑盒。本試劑盒每個(gè)樣品的細(xì)胞數(shù)量可以為0-00萬。
碘化丙啶是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假設(shè)G0/G期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2，正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為-2之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導(dǎo)致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G峰，即凋亡細(xì)胞峰。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向和側(cè)向光散射的信號均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察細(xì)胞凋亡情況。
本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測。
操作步驟：
、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
a．對于貼壁細(xì)胞：小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約毫升冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清。再次加入ml冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞。
b．對于懸浮細(xì)胞：000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約ml冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。再次加入ml冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞。
2、細(xì)胞固定：
取4毫升冰浴預(yù)冷的95%乙醇，低速渦旋震蕩的同時(shí)加入毫升細(xì)胞懸液，混勻后4℃固定2小時(shí)或更長時(shí)間。固定2-24小時(shí)可能效果更佳。000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細(xì)胞。對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的乙醇，以避免吸走細(xì)胞。加入約5ml冰浴預(yù)冷的PBS，重懸細(xì)胞，再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
3、PI染色液的配制：
注：配制好的PI染色液短時(shí)間內(nèi)可以4℃保存，宜當(dāng)日使用。
4、染色：
每管細(xì)胞樣品中加入400μl PI染色液，緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀，37℃避光溫浴30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時(shí)內(nèi)完成流式檢測，最好能在當(dāng)日完成流式檢測。
5、流式檢測和分析：
用流式細(xì)胞儀在激發(fā)波長488 nm波長處檢測紅色熒光，同時(shí)檢測光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞DNA含量分析和光散射分析。
儲存條件：-20℃，避光保存

注意事項(xiàng)：
、懸浮細(xì)胞用此法時(shí)必須經(jīng)離心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不僅與活細(xì)胞數(shù)成比例，也受作用時(shí)間的影響，因此當(dāng)樣品較多時(shí)測定的OD 值可能隨時(shí)間而變。
3、MTT 溶液為黃色，需避光保存，長時(shí)間光照會導(dǎo)致失效。當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請勿使用。MTT 溶液在4℃或較低溫度情況下會凝固，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
4、為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
PPA （5 mg）     5phenyl4Epentenol； PPA
Sunitinib Maleate， SU， Sutent， PHA0AD， PNU0AD     EZSolution Sunitinib Malate
（R）MG2 （25 mg）     N[（phenylmethoxy）carbonyl]LleucylN[（R）formyl3methylbutyl]Lleucinamide； （R）MG2
Naloxone （hydrochloride） （00 mg）     NAllyldihydrohydroxynormorphinone|NIH 90； 4,5αepoxy3,dihydroxy（2propenyl）morphinan6one, monohydrochloride
Stearoyl Ethanolamided3 （ mg）     N（2hydroxyethyl）octadecanamide，，d3； Ceramidd3|Stearic Acid Ethanolamided3； Stearoyl Ethanolamided3
6TAMRA CPG     6TAMRA CPG 000
GLUCOSETRISEDTASTERILEGTE緩沖液生物技術(shù)級00MLCOLD
酮彈性體　IINA
GLYMOγ(2,3環(huán)氧丙氧)丙基氧基烷00克FMP，%
苯 4Phenylbutyric acid,99% 2 5G 標(biāo)準(zhǔn)品
拂米龍 FluoroMqtholonq
M9MEDIUMBROTH,POWDERM9培養(yǎng)基肉湯生物技術(shù)級RT不sigma
287偶氮二羧97%Dietxyl azodicarboxylate
Rambach瓊脂支RT
4乙基 4Ethylresorcinol,98% 28608 5G 通用試劑
化亞/一化/甘/Mercuric chloride CP，99%， 500克 國產(chǎn)/進(jìn)口
小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD7)ELISA試劑盒 ，英文名： TFR/CD7 ELISA Kit
小鼠心肌營養(yǎng)素(CT-)ELISA檢測試劑盒Mousecardioophln,CT-ELISAKit 96T/48T
人抗α干擾素抗體(IFNα-Ab)免疫試劑盒 Human IerferonαAibody,IFNα-Ab ELISA Kit
Rabbiturokinaseplasminogenactivator,uPAELISAKit兔尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細(xì)胞GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒0/20次
Humanβ-lactamaseELISA試劑盒人β內(nèi)酰胺酶(β-lactamase)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)ELISA試劑盒 ，英文名： βCTx ELISA Kit
人多巴胺D2受體(D2R)ELISA檢測試劑盒HumandopamineD2receptor,D2RELISAKit 96T/48T
大鼠甲狀腺球蛋白(TG)免疫試劑盒 Rat Thyroglobulin,TG ELISA Kit
英文名稱RatE-SelectinELISAkit大鼠E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
抗體稀釋緩沖液00毫升
ELISAKitCALLA人普通急性淋巴細(xì)胞白血病抗原規(guī)格：48T/96T
細(xì)胞周期與凋亡檢測試劑盒操作規(guī)程
、在96孔板加入細(xì)胞00μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入00微升5000～0000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0～0μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及00%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
 a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（完全培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（完全培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×00
 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 0%時(shí)的藥物濃度(IC90)

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