ABTS自由基清除能力測試試劑盒
（A005-96T 酶標(biāo)板法）
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一、 測定原理
采用ABTS（2,2′-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt）評價(jià)樣品抗氧化能力最初由Miller等（1993）提出，現(xiàn)采用的一般是后來Re等（1999）改進(jìn)后的方法。該方法利用ABTS可被過硫酸鉀、過氧化氫、二氧化錳等一系列化合物氧化，生成藍(lán)綠色的ABTS⁺陽離子自由基，在734nm處有最大吸收峰。在抗氧化劑的作用下， ABTS⁺還原成無色的ABTS。通過測定734nm處的吸光值，即可判定反應(yīng)物的抗氧化能力。
二、 試劑組成
試劑一：ABTS試劑300μL × 1支
試劑二：液體試劑300μL × 1支
試劑三：1mM Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液 1ml×1支（乙醇配制）
三、 儲存條件及有效期
試劑盒-20℃可保存6個(gè)月。
四、 試劑的配制
ABTS應(yīng)用液：將試劑二小心全部轉(zhuǎn)入試劑一管內(nèi)，旋好管蓋，搖勻，室溫放置12-16h，得到ABTS濃縮液。取10μLABTS濃縮液，采用稀釋液（稀釋液先采用純水20×稀釋）稀釋至734nm處吸光度為0.65-0.75，記下稀釋倍數(shù)（通常稀釋倍數(shù)為50-200倍，可先從80-100倍區(qū)間內(nèi)開始嘗試。）將剩余濃縮液按稀釋倍數(shù)稀釋，得到ABTS應(yīng)用液，避光存放。
Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液：如您需要將樣品的ABTS自由基清除能力表示為Trolox當(dāng)量（TEAC），則需要同步測定Trolox的ABTS清除能力；如您僅需要將結(jié)果表示為ABTS自由基清除率，則您可以忽略此步驟（可以不需要用到試劑三）。
五、 操作步驟

	空白孔	測定孔	對照孔1
ABTS應(yīng)用液（μL）	200	200
樣品溶液（μL）		20	20
稀釋液（μL）2	20		200

充分混勻，室溫避光靜置30min³使之充分反應(yīng)。734nm處采用酶標(biāo)儀測定吸光值。
¹如樣品顏色較淺可不做對照管（即認(rèn)為對照為0）；
²稀釋液即您配制樣品的溶劑，一般為水、乙醇、PBS等；
²建議反應(yīng)30min，數(shù)值更為準(zhǔn)確，但一般快速測定時(shí)，反應(yīng)10min即可（參考文獻(xiàn)：）。
 
六、注意事項(xiàng)
1. 如樣品中色素物質(zhì)不是分析對象，建議先進(jìn)行脫色處理，處理后樣品可不做對照孔；
2. 如不確定樣品的ABTS自由基清除能力，可先做不同濃度的稀釋液進(jìn)行摸索，并選擇適宜濃度進(jìn)行測定，高濃度下，濃度與清除率間并不線性相關(guān)。Trolox標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制建議選取100-1000μM的濃度進(jìn)行分析；
3. 混勻很重要，建議加樣時(shí)反復(fù)吹打，加樣結(jié)束后劇烈振搖酶標(biāo)板30秒以上（液體不能濺出來）。

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