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T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein 同樣來源于T4噬菌體,屬于ABC家族ATP酶,具有典型的兩亞基結(jié)構(gòu),包含ATP結(jié)合位點(diǎn)和相互作用位點(diǎn)。T4 UvsY蛋白是RPA技術(shù)中另一關(guān)鍵酶,它與T4 UvsX Recombinase共同發(fā)揮作用。T4 UvsY蛋白可與T4 UvsX Recombinase形成異四聚物復(fù)合體,促進(jìn)T4 UvsX Recombinase與單鏈DNA的相互作用。T4 UvsY蛋白可增強(qiáng)T4 UvsX Recombinase與DNA的結(jié)合,促進(jìn)其替換過程,并協(xié)助其進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)。
T4 UvsY蛋白由E.coli表達(dá)的重組蛋白,是將蛋白基因接入穩(wěn)定表達(dá)載體,經(jīng)克隆篩選,質(zhì)量驗(yàn)證,挑選的穩(wěn)定表達(dá)株,由化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基(不含有任何動(dòng)物源成分)發(fā)酵制備,工藝穩(wěn)定,保證了產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。
聯(lián)系電話:18018625233 QQ:2303607288
規(guī)格參數(shù):
貨號(hào):EH03601
規(guī)格:100ug/500ug/1mg/10mg
為工業(yè)客戶提供g級(jí)。
質(zhì)量控制:
純 度:
經(jīng)高效液相色譜(SEC-HPLC)和SDS-PAGE檢測(cè),純度大于95%.
使用說明:
長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-80℃,首次使用后保存于-20℃,避免反復(fù)凍融。
工作機(jī)理:
T4 UvsY蛋白在RPA反應(yīng)中的主要作用是:
(1) 促進(jìn)T4 UvsX Recombinase與單鏈DNA的結(jié)合
T4 UvsY蛋白與T4 UvsX Recombinase形成復(fù)合體,并且促進(jìn)后者與單鏈DNA的結(jié)合,從而增強(qiáng)單鏈DNA的穩(wěn)定性。
(2) 加速T4 UvsX Recombinase的替換
當(dāng)引物退火并開始進(jìn)行聚合酶延伸時(shí),T4 UvsY蛋白可加速T4 UvsX Recombinase從單鏈DNA上的替換,使核酸模板完全暴露,有利于延伸反應(yīng)的進(jìn)行。
(3) 促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入
T4 UvsY蛋白還可協(xié)助T4 UvsX Recombinase進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),這有利于將RPA技術(shù)應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)的DNA及RNA。
作用機(jī)制:
T4 UvsY蛋白主要通過三種機(jī)制促進(jìn)T4 UvsX Recombinase的功能。
(1) 蛋白間相互作用
T4 UvsY蛋白可直接與T4 UvsX Recombinase形成穩(wěn)定的蛋白復(fù)合體,促進(jìn)其結(jié)合和釋放DNA的動(dòng)力學(xué)過程。
(2) ATP酶活性
T4 UvsY蛋白本身具有ATP酶活性,可加速T4 UvsX Recombinasemediated DNA結(jié)合和解離所需的ATP水解過程。
(3) DNA依賴性ATPase活性
T4 UvsY蛋白與DNA-T4 UvsX Recombinase復(fù)合體結(jié)合后,其ATP酶活性顯著增加,這加速了T4 UvsX Recombinase的替換過程。
T4 UvsY蛋白是RPA技術(shù)中發(fā)揮關(guān)鍵作用的一種ATP酶,其主要應(yīng)用如下:
1. 提高RPA反應(yīng)效率
T4 UvsY蛋白可增強(qiáng)T4 UvsX Recombinase與單鏈DNA的結(jié)合,促進(jìn)其替換過程,這可提高RPA反應(yīng)的效率和靈敏度,實(shí)現(xiàn)更高效的等溫?cái)U(kuò)增。
2. 商業(yè)RPA試劑盒
許多商業(yè)RPA試劑盒中的重組酶成分除T4 UvsX Recombinase外,還包含T4 UvsY蛋白,如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。這些試劑盒的性能優(yōu)于僅含T4 UvsX Recombinase的試劑盒。
3. 檢測(cè)低豐度靶核酸
由于T4 UvsY蛋白的作用,RPA技術(shù)的檢測(cè)靈敏度顯著提高,可實(shí)現(xiàn)更低豐度的DNA/RNA的檢測(cè),滿足某些樣本極低濃度下的檢測(cè)需求。
4. 實(shí)現(xiàn)細(xì)胞核內(nèi)檢測(cè)
T4 UvsY蛋白還可協(xié)助T4 UvsX Recombinase進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),這使RPA技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞核內(nèi)DNA和RNA的檢測(cè),滿足相關(guān)研究與診斷的需求。
5. 病原體低豐度檢測(cè)
聯(lián)合使用與特定病原體高度同源的引物,T4 UvsY蛋白及RPA技術(shù)可實(shí)現(xiàn)病原體極低豐度的快速檢測(cè),應(yīng)用于某些病原體感染的診斷,特別是病毒感染的診斷。
6. 微生物快速檢測(cè)
設(shè)計(jì)與特定微生物同源的引物,聯(lián)合T4 UvsY蛋白及RPA技術(shù),可實(shí)現(xiàn)相關(guān)微生物DNA/RNA的快速檢測(cè),滿足微生物檢測(cè)與鑒定的需求,應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全等領(lǐng)域。
7. miRNA表達(dá)檢測(cè)
利用與特定miRNA同源的引物,聯(lián)合T4 UvsY蛋白及RPA技術(shù),可靈敏度檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)miRNA的表達(dá),實(shí)現(xiàn)miRNA功能研究與miRNA作為生物標(biāo)記物的開發(fā)等。
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相關(guān)RPA原料:
EH03201 Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase
EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV
EH04701 核酸外切酶 III Exonuclease III
EH02501 M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶 M-MuLV Reverse Transcriptase
EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment
EH04501 重組肌酸激酶(CK) Creatine Kinase
EH03501 T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase
EH03401 T4噬菌體基因32編碼蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein