LbuCas13a是一種來源于細(xì)菌 Leptotrichia buccalis的Cas13a效應(yīng)蛋白。它屬于IV型CRISPR-Cas系統(tǒng)，可利用CRISPR RNA(crRNA)來識(shí)別和切割RNA。LbuCas13a相對(duì)分子質(zhì)量約為132kDa。它包含兩個(gè)高度保守的結(jié)構(gòu)域：HEPN和RuvC，與crRNA結(jié)合后可激活其內(nèi)切酶活性，對(duì)RNA進(jìn)行切割。

本產(chǎn)品由E.coli表達(dá)的重組蛋白，是將蛋白基因接入穩(wěn)定表達(dá)載體，經(jīng)克隆篩選，質(zhì)量驗(yàn)證，挑選的穩(wěn)定表達(dá)株，由化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基（不含有任何動(dòng)物源成分）發(fā)酵制備，工藝穩(wěn)定，保證了產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。

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規(guī)格參數(shù)：

貨號(hào)：EH00302      

規(guī)格：100/1000pmol.

為工業(yè)客戶提供n*1000pmol規(guī)格

質(zhì)量控制:

純      度: 

經(jīng)高效液相色譜（SEC-HPLC）和SDS-PAGE檢測(cè)，純度大于95%.

使用說明：

長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-80℃，首次使用后保存于-20℃,避免反復(fù)凍融。

技術(shù)原理:

LbuCas13a通過堿基配對(duì)識(shí)別crRNA和目標(biāo)RNA之間的同源序列，與之結(jié)合后激活，在目標(biāo)RNA進(jìn)一步切割其他區(qū)域，這被稱為“異核酶的自恢復(fù)特征”。該過程可導(dǎo)致高效的RNA分解。 

特點(diǎn)與優(yōu)勢(shì):

(1) LbuCas13a可特異性識(shí)別和切割RNA，而非DNA，這令其成為CRISPR系統(tǒng)中首個(gè)RNA靶向的工具。

(2) LbuCas13a具有RNA的自恢復(fù)切割功能，可導(dǎo)致RNA高效降解，這有利于RNA的功能研究及基于RNA的治療方法的開發(fā)。

(3) LbuCas13a對(duì)溫度和離子環(huán)境不太敏感，在寬范圍的條件下保持穩(wěn)定和活性，易于保存及操作。

(4) LbuCas13a可識(shí)別不同長(zhǎng)度(約23-38 bp)的crRNA，這為其RNA靶向帶來更高的靈活性。

LbuCas13a在以下方面具有重要應(yīng)用潛力:

(1) RNA功能研究：實(shí)現(xiàn)特定RNA的敲除與破壞，用于研究RNA在生物體中的生理功能。

(2) RNA病毒檢測(cè)與治療：可用于檢測(cè)和抑制RNA病毒的增殖。

(3) 離體和在體基因治療：利用LbuCas13a表達(dá)載體傳遞crRNA，抑制靶細(xì)胞內(nèi)的病理性RNA。 

(4) 體外RNA檢測(cè)：設(shè)計(jì)與靶RNA同源的crRNA，檢測(cè)樣本中靶RNA的存在與表達(dá)水平。

(5) 農(nóng)業(yè)病害治療：抑制植物病原體中的關(guān)鍵RNA，達(dá)到防治作用。

LbuCas13a在體外診斷領(lǐng)域有重要的應(yīng)用潛力：

1. RNA病毒檢測(cè)

設(shè)計(jì)與RNA病毒基因組高度保守的區(qū)域互補(bǔ)的crRNA，可特異性檢測(cè)該病毒的存在，用于臨床病毒性疾病的快速診斷。 

2. 體外RNA表達(dá)檢測(cè)

針對(duì)特定RNA標(biāo)記物設(shè)計(jì)crRNA，可檢測(cè)樣本中靶RNA的表達(dá)水平，用于癌癥診斷、疾病檢測(cè)等。

工作流程如下:

(1) 設(shè)計(jì)與靶RNA高度同源的crRNA序列。

(2) 將crRNA與待檢測(cè)樣本RNA共孵育。

(3) 如果存在互補(bǔ)的靶RNA，LbuCas13a與之結(jié)合并激活，對(duì)靶RNA進(jìn)行切割。

(4) 通過qPCR檢測(cè)LbuCas13a切割產(chǎn)物或其活性，判斷靶RNA的存在與表達(dá)量。

(5) 該方法靈敏度高、特異性強(qiáng),可實(shí)現(xiàn)RNA的高通量檢測(cè)，相比傳統(tǒng)方法更加簡(jiǎn)便快速。

3. 細(xì)胞RNA譜檢測(cè)

利用LbuCas13a及對(duì)應(yīng)的crRNA庫，可以檢測(cè)細(xì)胞中全 transcriptome RNA的表達(dá)變化，用于藥理學(xué)研究、疾病診斷等。 

4. 病原體RNA檢測(cè)

針對(duì)病毒、細(xì)菌等病原體的保守RNA區(qū)域設(shè)計(jì)crRNA，實(shí)現(xiàn)特異性病原體檢測(cè)，用于臨床快速診斷。

5. 非編碼RNA檢測(cè)

設(shè)計(jì)與靶向miRNA、lncRNA等互補(bǔ)的crRNA，實(shí)現(xiàn)非編碼RNA的高通量檢測(cè)與定量分析。

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