訂購信息：

檢測原理：

試紙條型RAA凍干顆粒是基于重組酶介導(dǎo)鏈置換核酸擴增（Recombinase-aid Amplification，RAA）技術(shù)開發(fā)的恒溫核酸擴增檢測試劑，在39～42℃恒溫條件下特異識別并擴增目標樣本的核酸片段，可配合試紙條進行檢測判斷。

產(chǎn)品用途：

RAA凍干顆�？蓱�(yīng)用于核酸DNA的快速擴增，根據(jù)需求選擇產(chǎn)品及規(guī)格。

儲存及有效期：

本產(chǎn)品存儲于2~28℃、干燥、避光條件下，有效期為12 個月。

引物設(shè)計：

RAA核酸擴增技術(shù)對引物設(shè)計的要求與常規(guī)PCR引物設(shè)計有一定的區(qū)別。由兩條寡核苷酸組成一對引物，分別特異性識別一個核酸目標物的上下游核苷酸序列；引物長度在28-35 nt之間，序列中無回文序列、連續(xù)單堿基重復(fù)序列和內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)區(qū)；引物Tm值不作為設(shè)計時主要考慮因素。建議在開展RAA（基礎(chǔ)型）擴增反應(yīng)之前，先進行引物的篩選試驗，以便得到較高的檢測靈敏度。

探針設(shè)計建議方法：探針長度在46-52 nt之間，序列避免回文序列、內(nèi)部二級結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基；探針的5’端用一種抗原標記物標記，通常為FAM基團或羧基熒光素；內(nèi)部含有堿基核苷酸類似物替換核苷酸（例如四氫呋喃殘基THF-有時稱為'dSpacer'）；3’末端有聚合酶延伸阻斷基團（例如C3-spacer，磷酸基或雙脫氧核苷酸）。如下圖所示：

注意：在開始實驗前檢查探針5’端標記的基團與下游引物5’端標記的基團是否與所用的試紙條相匹配；建議在開展 RAA試紙條型擴增反應(yīng)之前，先進行引物的篩選試驗，以便得到較高的檢測靈敏度。

產(chǎn)品說明：

1. 本產(chǎn)品是“Ready to Use”即用型 RAA凍干顆粒；含有除引物和探針外所有的反應(yīng)要素，如重組酶、DNA 聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。

2. 試劑盒最低檢測下限為 10-100copies/測試（依據(jù)引物篩選優(yōu)化程度和檢測手段）。

3. RAA試劑擴增DNA。

4. 試紙條型試劑：含有外切酶適用于試紙條法分析擴增產(chǎn)物。

適用儀器：

恒溫金屬浴、恒溫水浴鍋、熒光PCR儀。

檢測步驟：

1. 核酸樣本提�。赫垍⒖紓鹘y(tǒng)DNA 提取方法或其他同效商品化試劑盒提取DNA樣本。

2. 樣本檢測

2.1 反應(yīng)體系： 單管反應(yīng)體系（25μL）：

2.2 操作步驟 

2.2.1 根據(jù)反應(yīng)數(shù)量，按照反應(yīng)體系配制含有水、上游引物(10 μM)、下游引物(10 μM)的 Mix，混合均勻后加入裝有核酸擴增試劑的檢測單元管中； 

2.2.2 向檢測單元管中加入經(jīng)步驟1處理得到的待測RNA樣本；

2.2.3 再向檢測單元管蓋上加入1.5~2.5 μL 的Mg2+，蓋上管蓋，上下顛倒 輕甩充分混勻5-6次，低速離心10 sec； （注：本步驟“是否充分混勻”將決定實驗結(jié)果的重復(fù)性） 

2.2.4 將檢測單元管放入37~40℃ 恒溫金屬�。ɑ蚝銣厮�浴鍋）中，孵育30min。熒光法則每隔30秒，采集一次熒光信號。 

2.2.5 試紙條檢測：反應(yīng)結(jié)束后，將25μL反應(yīng)體系液用無菌水或者PBS稀釋（25μL反應(yīng)體系液:150μL稀釋劑），利用通用型核酸檢測試紙條進行檢測。

結(jié)果分析與判定： 

可以根據(jù)試紙條判定實驗結(jié)果。

注意事項：

1. 試劑條檢測，推薦使用免開蓋的裝置進行試紙條檢測，避免氣溶膠污染。 

2. 開始檢測前請仔細閱讀本說明書全文，并嚴格按照要求進行操作。 

3.不同類型樣品所提取的核酸含量和純度有差異，可能導(dǎo)致擴增效率不同。 

4.當實驗室環(huán)境、試劑、儀器或配件存在陽性物質(zhì)（例如質(zhì)粒、擴增產(chǎn)物等）污染，或樣本間存在交叉污染的情況時，會影響檢測結(jié)果準確性，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

5. 務(wù)必保證試劑保存、配制或運輸?shù)卯�，否則可能導(dǎo)致試劑檢測性能下降，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。 

6. 陽性對照為質(zhì)粒，適用于評價本試劑核酸擴增性能。 

7. 請嚴格按照基因擴增實驗室的管理規(guī)范進行操作。 實驗結(jié)束后，檢測過程中所產(chǎn)生的廢棄物應(yīng)按照相關(guān)規(guī)范進行處理。

相關(guān)產(chǎn)品：

HP80201 基礎(chǔ)型RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80202 熒光型RAA 核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80203 基礎(chǔ)型RT-RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80204 熒光型RT-RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80205 試紙條型RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

HP80206 試紙條型RT-RAA核酸擴增試劑（凍干顆粒）

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