Bradford總蛋白含量測(cè)試試劑盒
（C003-1000T 酶標(biāo)板法）
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一、測(cè)定原理
在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán)G250（Coomassie brilliant blue G250）染料主要與蛋白質(zhì)中的堿性氨基酸（特別是精氨酸和賴氨酸）和芳香族氨基酸的殘基通過疏水力相結(jié)合，從而使染料的最大吸收峰由波長(zhǎng)465nm變?yōu)椴ㄩL(zhǎng)595nm，溶液的顏色由棕紅色變?yōu)樗{(lán)色。在一定蛋白濃度范圍內(nèi)，溶液在波長(zhǎng)595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)濃度呈線性關(guān)系。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可通過測(cè)定樣品在波長(zhǎng)595nm的吸光度計(jì)算樣品的蛋白質(zhì)濃度；然后根據(jù)公式計(jì)算生物樣品的可溶性蛋白質(zhì)含量。
二、試劑組成

• 100ml×2瓶
• 2.5mg/ml結(jié)晶牛血清蛋白（BSA）標(biāo)準(zhǔn)品，0.5ml×3管

三、儲(chǔ)存條件及有效期

• 4℃避光保存；試劑二-20℃保存�？杀４�12個(gè)月。

四、試劑的配制
標(biāo)準(zhǔn)品的配制：移取100μL試劑二（標(biāo)準(zhǔn)品），加入900μL雙蒸水，充分混勻，得到1ml濃度為250μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，分別移取0，2，4，6，8，12，16，20μL于酶標(biāo)板中，加入20，18，16，14，12，8，4，0μL雙蒸水，得到0，25，50，75，100，150，200，250μg/ml的BSA標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液。
五、操作步驟

	空白孔	測(cè)定孔	標(biāo)準(zhǔn)孔
樣品稀釋液（μL）	20
標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液（μL）			20
樣品溶液（μL）		20
顯色液（μL）	200	200	200
充分混勻，靜置5分鐘，酶標(biāo)儀595nm處測(cè)吸光值

 
六、計(jì)算方法
1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
以標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液濃度0，25，50，75，100，150，200，250μg/ml為橫坐標(biāo)，以酶標(biāo)儀測(cè)得的吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并得到方程，一般認(rèn)為相關(guān)系數(shù)（R²）大于0.99可用。實(shí)測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：

2. 計(jì)算樣品濃度
由計(jì)算得到的方程求樣品濃度。
七、注意事項(xiàng)
1. 染色液接觸皮膚后較難清洗，請(qǐng)務(wù)必戴手套操作。
2. 本方法靈敏度高，可以測(cè)定最低至25μg/mL的蛋白質(zhì)濃度，蛋白濃度過高會(huì)超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，務(wù)必稀釋后測(cè)定。推薦標(biāo)曲范圍0-250μg/mL，但實(shí)測(cè)0-400μg/mL濃度范圍內(nèi)標(biāo)曲相關(guān)系數(shù)通常能夠達(dá)到0.999以上。具體范圍請(qǐng)用戶根據(jù)標(biāo)曲制作情況判斷。
3. Bradford法測(cè)定蛋白濃度不受一般濃度還原型試劑如β-巰基乙醇、二硫蘇糖醇(DTT)影響；但受去垢劑影響。如樣品處理時(shí)加入過SDS、Triton X-100、Tween 等試劑，建議改用其它方法如BCA法測(cè)定。

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