規(guī)格:50ml/100ml,價(jià)格:125/235元,產(chǎn)品簡(jiǎn)介
BCA蛋白濃度測(cè)定法是最常用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一, BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單,高穩(wěn)定性,高靈敏度和高兼容性。本試劑盒測(cè)定蛋白濃度靈敏度高,檢測(cè)濃度下限達(dá)到25µg/ml,最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5µg,待測(cè)樣品體積為1-20µl。在50-2000µg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。而且不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響,可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響,需確保EDTA低于10mM,無EGTA,二硫蘇糖醇低于1mM,β-巰基乙醇低于0.01%。
試劑盒組份
組 份(50ml)(100ml) 存儲(chǔ)溫度
蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液( 5μg/μL ) 5 mL 10 mL -20℃
BCA試劑A 50 mL 100 mL 4℃
BCA試劑B 1 mL 2 mL 4℃
試劑盒以外自備儀器和試劑
可調(diào)移液器、1.5m L離心管或96孔板、渦旋振蕩器、酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)(測(cè)定波長(zhǎng)為540-595nm之間,562nm最佳)。
操作步驟
A、普通分光光度計(jì)操作 1、 估計(jì)樣品蛋白的濃度范圍,并將樣品稀釋至合適濃度。2、 BCA工作液的準(zhǔn)備:根據(jù)樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。
管號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 7 8(…樣品)
蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL) 0 5 10 20 40 60 80 100 0
去離子水(μL) 100 95 90 80 60 40 20 0 100-X
樣品(μL) 0 0 0 0 0 0 0 0 X
BCA工作液(μL) 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000
對(duì)應(yīng)蛋白含量(μg) 0 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 50.0 待測(cè)3、 取若干個(gè)帶蓋的1.5 mL離心管,編好號(hào)后,按下表加入試劑: 4、 各管充分混勻,37℃放置30分鐘,然后以0號(hào)管做參比在562nm下比色測(cè)定,記錄各管的吸光值。根據(jù)管號(hào)1、2、3、4、5、6、7的吸光值以蛋白含量(μg)為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、 根據(jù)所測(cè)樣品的吸光值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量(μg), 除以加入樣品的體積(XμL),乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度。 B、酶標(biāo)板操作1、 估計(jì)樣品蛋白的濃度范圍,并將樣品稀釋至合適濃度。2、 BCA工作液的準(zhǔn)備:根據(jù)樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。3、 取一塊酶標(biāo)板,按照下表加入試劑:
孔號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 7 8(…樣品)
蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(μL) 0 1 2 4 8 12 16 20 0
去離子水(μL) 20 19 18 16 12 8 4 0 20-X
樣品(μL) 0 0 0 0 0 0 0 0 X
BCA工作液(μL) 200 200 200 200 200 200 200 200 200
對(duì)應(yīng)蛋白含量(μg) 0 5 10 20 40 .0 80 100 待測(cè) 4、 把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30sec,37℃放置30分鐘再次振蕩,然后以0號(hào)孔在562nm下用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色測(cè)定。記錄各孔的吸光值。根據(jù)孔號(hào)1、2、3、4、5、6、7的吸光值以蛋白含量(μg)為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。5、 根據(jù)所測(cè)樣品的吸光值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量(μg), 除以加入樣品的體積(XμL),乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度。
保存條件
蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液-20℃保存,BCA試劑A 和BCA試劑B 4℃保存,一年有效。
注意事項(xiàng)
1、 BCA試劑A 和BCA試劑B使用前請(qǐng)顛倒3-5次,混勻。2、 配制好的混合BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。3、 加入BCA工作液后,也可以在室溫放置2小時(shí)測(cè)定。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí),吸光度會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深,并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。實(shí)驗(yàn)中可對(duì)作用溫度和作用時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化,如果濃度較低,適合在較高溫度孵育,或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。4、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)液請(qǐng)?jiān)谑褂们跋然靹,再稀釋成一系列不同濃度的蛋白?biāo)準(zhǔn)。5、 比色應(yīng)在2h內(nèi)完成。6、 請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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上海一基實(shí)業(yè)有限公司主要生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)國(guó)家級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品,實(shí)驗(yàn)室耗材等。同時(shí)代理美國(guó)、日本、英國(guó),德國(guó)等國(guó)家的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)樣品。本著標(biāo)準(zhǔn)第一、質(zhì)量第一,服務(wù)第一,信譽(yù)第一的宗旨,為客戶提供售前.售中.售后的優(yōu)質(zhì)服務(wù)。我公司全體工作人員真誠(chéng)的歡迎國(guó)內(nèi)外客戶的大力支持與合作。
業(yè)務(wù)范圍:
a, 銷售中檢所、自制標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品及進(jìn)口試劑
b, 承接克級(jí)至公斤級(jí)高純度單體的定制業(yè)務(wù)
c, 承接中藥單體/標(biāo)準(zhǔn)品新品研發(fā)業(yè)務(wù)