植物總糖蛋白樹脂法純化試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

植物總糖蛋白樹脂法純化試劑是一種旨在通過麥胚凝集素親和樹脂的高度選擇性結(jié)合，進(jìn)一步競(jìng)爭(zhēng)性溫和洗脫，獲得純化總糖蛋白的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于植物細(xì)胞或組織裂解懸液等復(fù)雜性蛋白體系中的糖蛋白的分離純化等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，純化結(jié)合能力強(qiáng)（100微克/次），回收純度和效率可達(dá)95％。

 

技術(shù)背景

 

蛋白質(zhì)糖基化（protein glycosylation）是常見的轉(zhuǎn)譯后修飾。在真核和原核生物中，通過天門冬酰胺（asparagine），即N-糖基；或絲氨酸/蘇氨酸（serine/threonine）部位，即O-糖基的寡聚糖（oligopolisaccharide）進(jìn)行糖基化。其作用于免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞黏附和接觸性抑制、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、防止蛋白降解、炎癥反應(yīng)和其它生物過程。使用親和層析技術(shù)，捕獲目標(biāo)蛋白中的多糖（glycan）成分，其中麥胚凝集素（wheat germ agglutinin；WGA）樹脂能夠優(yōu)先結(jié)合N-乙酰氨基葡萄糖（N-acetylglucosamine；GlcNAc）和終端N-乙酰氨基葡萄糖，以及唾液酸（sialic acid）。N-乙酰氨基葡萄糖是N-糖基和O-糖基糖蛋白的基本結(jié)構(gòu)分子，由此獲得純化的糖蛋白。 

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

緩沖液（Reagent A）  10毫升

親和液（Reagent B）      500微升

洗脫液（Reagent C）       5毫升

產(chǎn)品說明書       1份

 

保存方式

 

保存在－20℃冰箱里；有效保證6月

 

用戶自備

 

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

平式搖蕩儀：用于混勻反應(yīng)物

微型臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

• 準(zhǔn)備好用戶自備的蛋白樣品
• 移取5毫克（100微升）樣品到2毫升離心管
• 加入800微升緩沖液（Reagent A），用手傾倒混勻
• 用手搖勻親和液（Reagent B）
• 迅速移取100微升親和液（Reagent B）到上述樣品管里，用手混勻
• 平放在平式搖蕩儀上，在4℃溫度下孵育4小時(shí)，速度為50RPM（注意：確保管內(nèi)液體流動(dòng)）
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升緩沖液（Reagent A），用手混勻
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟9至11二次
• 加入250微升洗脫液（Reagent C），用手混勻
• 平放在平式搖蕩儀上，在4℃溫度下孵育30分鐘，速度為50RPM（注意：確保管內(nèi)液體流動(dòng)）
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為3500g
• 小心移取上清液到預(yù)冷的新的1.5毫升離心管，置于冰槽里
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至16一次
• 保存純化的蛋白在－70℃冰箱里
• 或移取10至20微升進(jìn)行SDS-PAGE電泳鑒定以及BRADFORD蛋白定量 

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為5次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 整個(gè)操作在4℃溫度下進(jìn)行
• 親和液（Reagent B）建議保存在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，建議分裝；如果保存在4℃溫度下，維持2月性能穩(wěn)定
• 親和液（Reagent B）每次使用100微升，每100微升可結(jié)合100微克純化卵類粘蛋白（ovomucoid），純度和回收率可高達(dá)95％
• 親和液（Reagent B）結(jié)合能力取決于蛋白性質(zhì)、蛋白分子量大小、蛋白可溶性程度、樣品環(huán)境等各種因素
• 通常洗脫次數(shù)為2次，每次200至300微升；增加洗脫次數(shù)和容量提高產(chǎn)量非常有限
• 建議使用BRADFORD定量方法進(jìn)行蛋白定量（－Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030），避免使用280nm檢測(cè)
• SDS-PAGE是檢測(cè)糖蛋白純度的最佳方法
• 本公司提供系列糖蛋白處理試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純化效果滿意

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