植物組織可溶性膜蛋白粗提制備試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

主要用途

植物組織可溶性膜蛋白粗提制備試劑是一種旨在通過(guò)特殊離液劑，增強(qiáng)融化效力，快速充分裂解植物組織，并在蛋白酶抑制混合劑的幫助下，通過(guò)超速離心，分離和收集所有可溶性植物組織細(xì)胞膜蛋白質(zhì)（完整蛋白和跨膜蛋白以及膜相關(guān)蛋白等）的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種新鮮或凍存植物組織，包括葉片（leaf）、谷粒（grain）、種子（seed）等樣品膜蛋白的制備。可直接用于后續(xù)蛋白電泳（SDS-PAGE）、西方雜交（Western blotting）、親和層析純化（affinity chromotagraphy）、免疫沉淀（immunoprecipitation）、蛋白質(zhì)相互作用分析（protein-protein interaction）、特異性表達(dá)識(shí)別（specific expression identification）和質(zhì)譜分析等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，收集效果好。

 

技術(shù)背景

 

通過(guò)特殊的離液劑（chaotropic reagent）和非離子性去垢劑，例如硫脲（thiourea）和Brij 58等，以及蛋白酶抑制混合劑的共同作用，既防止裂解后植物組織內(nèi)各種活性蛋白成分遭到活化的內(nèi)源性蛋白酶的破壞，充分保留組織細(xì)胞膜蛋白的免疫和生物學(xué)活性，又確保膜蛋白（完整蛋白integral protein和跨膜蛋白transmembrane protein）的高產(chǎn)萃取，并更大程度地可溶性，便于后續(xù)電泳和質(zhì)譜分析。 

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A）      60毫升

裂解液（Reagent B） 60毫升

活性液（Reagent C）     300微升

溶解液（Reagent D）      20毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書  1份

 

保存方式

 

保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，有效保證6月

 

用戶自備

 

液氮管：用于組織凍存處理

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于樣品操作的容器

DOUNCE勻漿器：用于裂解組織

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

 

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的試劑從－20℃的冰箱里取出，室溫下凍融。然后進(jìn)行下列操作。

 

• 準(zhǔn)備好植物組織，例如葉片、種子等，并秤重200毫克 
• （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入3毫升清理液（Reagent A）清洗
• （選擇步驟）抽去清理液
• 移入到一個(gè)液氮凍存管
• 即刻放進(jìn)液氮罐過(guò)夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融）
• 放進(jìn)一個(gè)新的預(yù)冷的2毫升離心管
• 加入1毫升裂解液（Reagent B）（注意：如果裂解液（Reagent B）出現(xiàn)結(jié)晶析出，可以溫育后使用） 
• 加入5微升活性液（Reagent C）
• 強(qiáng)力渦旋震蕩30秒，充分混勻
• 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器
• 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80下）
• 將所有組織勻漿物移入2毫升離心管
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
• 小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的2毫升離心管
• 即刻放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心30分鐘，速度為16000g
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升裂解液（Reagent B）（注意：如果裂解液（Reagent B）出現(xiàn)結(jié)晶析出，可以溫育后使用） 
• 加入5微升活性液（Reagent C）
• 強(qiáng)力渦旋震蕩30秒，充分混勻
• 室溫下孵育5分鐘
• 即刻放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心30分鐘，速度為16000g
• 小心抽去上清液
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟19至24一次
• 加入1毫升溶解液（Reagent D）（注意：如果溶解液（Reagent D）出現(xiàn)結(jié)晶析出，可以溫育后使用）
• 強(qiáng)力渦旋震蕩30秒，充分混勻
• 室溫下孵育15分鐘，期間每隔5分鐘渦旋震蕩5秒
• 即刻放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心30分鐘，速度為16000g
• 小心移取上清液到新的2毫升離心管
• 放進(jìn)－70℃的冰箱里備用
• 或放進(jìn)冰槽里，繼續(xù)后續(xù)操作

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為20次操作
• 操作時(shí)須戴手套
• 建議一次操作的組織重量在10至250毫克
• 建議使用新鮮或冰凍保護(hù)良好的植物組織
• 如果組織含有高濃度的多糖和多酚，建議使用多糖/多酚植物組織蛋白制備預(yù)處理試劑盒－30089
• 碾碎組織步驟：可以將液氮處理的組織放進(jìn)研缽研磨成粉
• 如果放在－70℃冰箱里儲(chǔ)存?zhèn)溆茫�避免反�?fù)凍融
• 本公司提供系列植物組織蛋白制備試劑產(chǎn)品
    

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無(wú)蛋白酶污染

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