聚糖對氨基苯甲酸（2-AA）熒光標(biāo)記試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

 

主要用途

 

聚糖對氨基苯甲酸（2-AA）熒光標(biāo)記試劑是一種旨在通過熒光探針對氨基苯甲酸和還原性糖分子的末端羧基碳的結(jié)合，進(jìn)而化學(xué)還原而產(chǎn)生的標(biāo)記糖分子，來識別和定量糖分子成分和豐度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于各種寡聚糖的標(biāo)記制備。產(chǎn)品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，熒光清晰，高度敏感。

 

技術(shù)背景

 

聚糖（glycan）是一種缺乏可見光或紫外光吸收特性的生物大分子，因此使用相應(yīng)的標(biāo)記分子成為聚糖分子敏感定量檢測分析所必需。運(yùn)用還原性氨基反應(yīng)化學(xué)（amination chemistry），將釋放出的聚糖分子游離還原末端，標(biāo)記上熒光探針，以達(dá)到純化分離、識別和定量的目的。對氨基苯甲酸（2-aminobenzoic acid；2-AA）是一種熒光標(biāo)記分子，分子量為137.1，具有紫外（315nm波長）吸收性和熒光特性（激發(fā)波長320nm，散發(fā)波長400nm）。在標(biāo)記糖分子中，為非特異性，超敏感（皮摩爾級），確保糖分子結(jié)構(gòu)完整性和穩(wěn)定性。標(biāo)記效率可達(dá)85%。首先糖分子處于一種還原形態(tài)，染料的胺基團(tuán)與糖分子的羧基碳之間反應(yīng)，產(chǎn)生親核性schiff堿配體結(jié)構(gòu)。然后通過化學(xué)還原劑進(jìn)行還原，而獲得標(biāo)記。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

標(biāo)記液（Reagent A）    5管

稀釋液（Reagent B）       500微升

反應(yīng)液（Reagent C）    5管

溶解液（Reagent D）       500微升

產(chǎn)品說明書    1份

 

保存方式

 

保存在-20℃冰箱里，避免潮濕和光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

1.5毫升離心管：用于樣品標(biāo)記操作的容器

干式恒溫儀：用于反應(yīng)孵育

離心濃縮儀：用于樣品干燥

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

• 樣品準(zhǔn)備

 

• 準(zhǔn)備好待測樣品：100皮摩爾至50納摩爾純化還原性寡聚糖
• 如果標(biāo)記糖蛋白中的寡聚糖分子，建議使用生物酶法分離寡聚糖分子
• 如果標(biāo)記糖蛋白或寡聚糖中的單糖分子，建議使用肼解法：即使用2摩爾TFA水解中性糖分子或使用4摩爾鹽酸水解氨基糖分子
• 待測樣品須為純化還原性聚糖：不含蛋白、肽、鹽類和去垢劑
• 建議待測樣品經(jīng)過離心濃縮儀處理或凍干處理為佳
• 建議樣品不得處于高于28℃和極端pH狀態(tài)

 

• 熒光標(biāo)記

 

實(shí)驗(yàn)開始前，從-20冰箱里分別取出1管標(biāo)記液（Reagent A）和反應(yīng)液（Reagent C），置于室溫下均衡。移取100微升稀釋液（Reagent B）（注意：使用前須凍融和渦旋混勻）到標(biāo)記液（Reagent A）管里，充分混勻后，加入到反應(yīng)液（Reagent C）管里，充分混勻，標(biāo)記為標(biāo)記工作液，避免光照（注意：須在1小時內(nèi)使用）。然后進(jìn)行下列操作。

 

• 移取100微升待測樣品（100皮摩爾至50納摩爾/100微升）到1.5毫升離心管
• 放進(jìn)離心濃縮儀離心干燥
• 加入5微升標(biāo)記工作液
• 用20微升槍頭抽吸混勻
• （選擇步驟）渦旋震蕩15分鐘
• 放進(jìn)微型臺式離心機(jī)瞬時離心8秒
• 放進(jìn)65℃干式恒溫儀孵育3小時，避免光照
• 室溫下靜置10分鐘均衡溫度
• 放進(jìn)離心濃縮儀離心干燥
• 即刻加入10微升溶解液（Reagent D）或用戶自備的溶解液，混勻
• （選擇步驟）如果暫時停止，可以保存在-70℃冰箱里
• 繼續(xù)后續(xù)操作

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為20次間斷操作或100次連續(xù)操作 
• 本產(chǎn)品可以標(biāo)記低達(dá)5皮摩爾純化單糖分子
• 操作時，須戴手套
• 稀釋液（Reagent B）使用前，確保凍融，可以在37℃溫育數(shù)分鐘，然后渦旋混勻后加入標(biāo)記液（Reagent A）試劑中
• 如果反應(yīng)液（Reagent C）難以溶解，可以置于65℃3分鐘，其間槍頭混勻，直至完全溶解
• 建議標(biāo)記樣品量為100皮摩爾至50納摩爾/100微升
• 標(biāo)記工作液不宜保存
• 標(biāo)記產(chǎn)物分子量計算：MW（glycan）+MW（2-AA；137.1）－16
• 本公司提供系列糖蛋白分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰

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