動物細(xì)胞糖蛋白高碘酸希爾法品紅亞硫酸鹽染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

 

主要用途

 

動物細(xì)胞糖蛋白高碘酸希爾法品紅亞硫酸鹽染色試劑是一種旨在通過高碘酸氧化糖蛋白中的糖基為乙醛，使用品紅亞硫酸鹽染料，產(chǎn)生品紅色或紫紅色，來分析細(xì)胞樣本中糖蛋白成分的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實驗證明的。主要適用于各種動物細(xì)胞涂片的糖蛋白成分檢測。產(chǎn)品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1,2-glycol）中的碳原子，成為乙醛基團（aldehyde group），與希爾試劑（Schiff’s Reagent），即品紅亞硫酸鹽染料（fuchsin sulfite）發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)品紅色（magenda）或紫紅色，表明糖蛋白陽性。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A）  250毫升

氧化液（Reagent B）   10毫升

染色液（Reagent C）   10毫升

產(chǎn)品說明書    1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent C），嚴(yán)格密封瓶口，避免光照；氧化液（Reagent B）和染色液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

 

用戶自備

 

通用型蘇木素復(fù)染試劑盒（80067.1）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

小型染色缸：用于細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

 

實驗步驟

 

操作一：細(xì)胞載玻片染色

• 樣本氧化處理

 

• 取出待測的細(xì)胞載玻片或細(xì)胞涂片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升氧化液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下，孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的氧化液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實驗步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上200微升染色液（Reagent C），鋪滿整個載玻片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見深紅色
• 小心移去載玻片上的染色液（Reagent C）
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

 

三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

 

• 樣本復(fù)染處理（建議使用通用型蘇木素復(fù)染試劑盒－80067.1）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：呈現(xiàn)紫紅色或品紅色為糖蛋白陽性細(xì)胞，細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色（復(fù)染）

 

操作二：24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

一、樣本氧化處理

 

1．小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長中的細(xì)胞表面

3．小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）

4．每孔加入400微升氧化液（Reagent B），覆蓋整個生長表面

5．在室溫下孵育5分鐘

6．小心抽去氧化液（Reagent B）

7．每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面

8．小心抽去清理液（Reagent A）

9．重復(fù)實驗步驟7和8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上400微升染色液（Reagent C），覆蓋整個生長表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見深紅色
• 小心抽去染色液（Reagent C）
• 小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實驗步驟4和6三次

 

三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

 

• 樣本復(fù)染處理（建議使用通用型蘇木素復(fù)染試劑盒－80067.1）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：呈現(xiàn)紫紅色或品紅色為糖蛋白陽性細(xì)胞，細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色（復(fù)染）

 

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為50次（細(xì)胞載玻片）和25次（1個24孔板）操作
• 操作時，須戴手套
• 所有操作在室溫下進行
• 氧化液（Reagent B）和染色液（Reagent C）具有腐蝕性，注意操作安全
• 染色液（Reagent C）出現(xiàn)沉淀，可以溫?zé)�、攪拌或過濾后使用
• 染色液（Reagent C）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色避免過度，肉眼可見深紅色即可終止染色
• 如果檢測胞漿糖蛋白，需要進行樣品預(yù)處理，例如：甲醛熏蒸（formaldehyde vapor）；或無水甲醇固定15分鐘；或微波爐加熱染色45秒
• 建議使用通用型蘇木素復(fù)染試劑盒（80067.1），增強染色對比度
• 細(xì)胞染色完成后，即刻進行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列糖蛋白分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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