動物組織石蠟切片糖蛋白高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色試劑盒產(chǎn)品說明書

（中文版）

主要用途

動物組織石蠟切片糖蛋白高碘酸希爾法阿爾新藍(lán)染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)分離石蠟方法的基礎(chǔ)上，通過阿爾新藍(lán)和高碘酸希爾方法的結(jié)合，完整互補(bǔ)地分析存檔中的石蠟包埋的組織切片 中蛋白多糖（糖蛋白）成分的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實驗證明的。主要適用于各種石蠟包埋組織切片中的糖蛋白成分，尤其是酸性和中性粘多糖蛋白檢測。產(chǎn)品即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

阿爾新藍(lán)（alcian blue）染料是一種水溶性的銅酞菁基團(tuán)（cuprophthalocyanine group）的堿性染料。由于分子中銅的存在，而呈現(xiàn)藍(lán)色。在低pH的環(huán)境下，阿爾新藍(lán)與多價陰離子硫酸化（sulfated）和羧化（carboxylated）自由基的多價陰離子反應(yīng)，例如酸性粘多糖蛋白（acidic mucopolysaccharide）、唾液粘多糖蛋白（sialomucins）以及糖蛋白，和酸性基團(tuán)形成鹽鍵（salt linkage），呈現(xiàn)（通常高碘酸希爾法陰性）藍(lán)色。高碘酸（periodic acid）可以氧化糖蛋白中的多糖（polysaccharide）糖基，包括乙二醇（1,2-glycol）中的碳原子，成為乙醛基團(tuán)（aldehyde group），與希爾試劑（Schiff’s Reagent），即品紅亞硫酸鹽染料（fuchsin sulfite）發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)品紅色（magenda）或紫紅色，表明中性粘多糖蛋白陽性。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

去石蠟液（Reagent A）       300毫升

補(bǔ)水液A（Reagent B）  100毫升

補(bǔ)水液B（Reagent C）  100毫升

補(bǔ)水液C（Reagent D）  100毫升

補(bǔ)水液D（Reagent E）  100毫升

清理液（Reagent F）  120毫升

酸性液（Reagent G）   10毫升

染色液A（Reagent H）   10毫升

氧化液（Reagent I）   10毫升

染色液B（Reagent J）   10毫升

產(chǎn)品說明書    1份

 

保存方式

 

保存在室溫下；染色液A（Reagent H）和染色液B（Reagent J），嚴(yán)格密封瓶口，避免光照；試劑具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

 

 

用戶自備

 

通用型蘇木素復(fù)染試劑盒（80067.1）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

小型染色缸：用于組織染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于組織染色后觀察分析

 

實驗步驟

 

• 去石蠟處理

 

• 取出10片待測的石蠟包埋的5微米厚組織切片 
• 放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• 室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

染色缸	孵育時間
50毫升去石蠟液（Reagent A）	15分鐘
50毫升去石蠟液（Reagent A）	15分鐘
50毫升去石蠟液（Reagent A）	15分鐘
50毫升補(bǔ)水液A（Reagent B）	3分鐘
50毫升補(bǔ)水液B（Reagent C）	3分鐘
50毫升補(bǔ)水液C（Reagent D）	3分鐘
50毫升補(bǔ)水液D（Reagent E）	3分鐘

 

• 小心移去切片上的補(bǔ)水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

二、樣本阿爾新藍(lán)染色處理

• 小心加上200微升酸性液（Reagent G），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘
• 小心移去切片上的酸性液（Reagent G）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加上200微升染色液A（Reagent H），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見藍(lán)色，避免光照
• 小心移去切片上的染色液A（Reagent H）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

 

• 樣本高碘酸希爾染色處理

 

• 小心加上200微升氧化液（Reagent I），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心移去切片上的氧化液（Reagent I）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 小心加上200微升染色液B（Reagent J），鋪滿整個切片樣品表面
• 室溫下孵育10分鐘；或直至可見深紅色，避免光照
• 小心移去切片上的染色液B（Reagent J）
• 室溫下，小心將切片置入50毫升清理液（Reagent F）中孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）

 

四、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

 

• 樣本復(fù)染處理（建議使用蘇木素復(fù)染試劑盒－80050）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：

酸性粘多糖蛋白――亮藍(lán)色

中性粘多糖蛋白和其它糖蛋白――品紅色

混合粘多糖蛋白――藍(lán)色或紫色

細(xì)胞核――深藍(lán)色（復(fù)染）

 

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時，須戴手套
• 石蠟包埋前，組織切片固定，避免使用單純甲醛固定；建議使用 Bouin固著液—12267
• 所有操作在室溫下進(jìn)行
• 試劑可以重復(fù)使用
• 試劑具有腐蝕性，注意操作安全
• 試劑溶液避免細(xì)菌污染
• 染色液B（Reagent J）出現(xiàn)沉淀，可以溫?zé)�、攪拌或過濾后使用
• 染色液B（Reagent J）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色避免過度，肉眼可見深藍(lán)或深紅色即可終止染色
• 可以使用通用型蘇木素復(fù)染試劑盒（80067.1），增強(qiáng)染色對比度
• 細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列糖蛋白分析試劑產(chǎn)品

 

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

上海一基實業(yè)有限公司多年專供：ELISA試劑盒，PCR恒溫?zé)晒鉁y試盒、朗道校準(zhǔn)品、校準(zhǔn)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品|對照品、抗體|抗原、生物試劑、動物血清、人類CDNA、基因組DNA、MicroRNA產(chǎn)品、總RNA產(chǎn)品、人原代細(xì)胞裂解液、生物試劑、高端試劑等系列產(chǎn)品。如需產(chǎn)品詳細(xì)說明等物理性質(zhì)信息請聯(lián)系客服為您查詢！質(zhì)量保證，價格優(yōu)惠，是國內(nèi)生物試劑權(quán)威的供應(yīng)商之一，專業(yè)經(jīng)銷生物科學(xué)領(lǐng)域的品牌試劑：Sigma試劑、ASROS試劑、AIFA試劑、alding試劑、Fisher試劑、日本MBL試劑、美國劍橋CIL氘代試劑、ATCC菌株等品牌產(chǎn)品。擁有齊全的生產(chǎn)和檢測設(shè)備，實施嚴(yán)格的管理制度和完善的質(zhì)量保證體系，為廣大客戶提供全面的技術(shù)支持和完善的售后服務(wù)。歡迎來電咨詢!