免疫印跡辣根過氧化酶/四甲基聯(lián)苯胺顯色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

 

主要用途

 

免疫印跡辣根過氧化酶/四甲基聯(lián)苯胺（HRP-TMB）顯色試劑是一種旨在通過過氧化物酶的催化，底物四甲基聯(lián)苯胺氧化形成藍(lán)黑色沉淀產(chǎn)物，以此鑒定過氧化物酶活性，進(jìn)而確定目標(biāo)分子表達(dá)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于辣根過氧化酶標(biāo)記的免疫學(xué)檢測包括蛋白質(zhì)西方雜交（Western blot）和其它分子檢測，例如南方（Southern blot）、北方（Northern blot）和點(diǎn)狀（Dot blot）印跡檢測等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復(fù)性好。

 

技術(shù)背景

 

四甲基聯(lián)苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine；TMB）是過氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在過氧化物酶的催化下，電子供體TMB底物在過氧化氫氧化下失去電子，在pH4.9條件下，產(chǎn)生游離自由陽離子單電子氧化產(chǎn)物，呈現(xiàn)出顏色變化和沉積，形成藍(lán)黑色沉淀產(chǎn)物，且不受乙醇影響。被用于檢測過氧化物酶的活性，靈敏度高（可達(dá)0.15納克），特異性好。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

染色液（Reagent A） 100毫升

產(chǎn)品說明書       1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證6月

 

用戶自備

 

無離子水：用于清洗染色后的印跡膜

PBST（12131）或TBST（12130）溶液：用于印跡膜清洗

成像儀：用于記錄染色圖像

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

• 準(zhǔn)備好含有待測分子的固相膜（5 X 8 cm²）：包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 加入5毫升室溫預(yù)熱的染色液（Reagent A），鋪滿整個(gè)固相膜表面
• 在室溫下孵育5至30分鐘，或直至藍(lán)黑色沉淀出現(xiàn)；避免光照
• 用鑷子夾起固相膜，放進(jìn)用戶自備的無離子水里
• 室溫下孵育1分鐘
• 空氣中晾干，避免光照
• 數(shù)碼相機(jī)拍照記錄

 注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為10次（10毫升體系）或20次（5毫升體系）操作
• 本產(chǎn)品較之二氨基聯(lián)苯胺（DAB）等染色，敏感10至20倍
• 可用于約1000 cm²免疫印跡膜片：建議5毫升用于1張5 X 8 cm²膜片
• 用戶可以根據(jù)需求，調(diào)整試劑用量
• 操作時(shí)，須戴手套
• 本產(chǎn)品適合于PVDF或硝酸纖維素（nitrocellulose）印跡膜
• 染色前清洗時(shí)，建議使用PBST或TBST溶液，避免使用酚類化合物和防腐劑，例如硫柳汞（thimerosal）
• 染色液（Reagent A）含有有機(jī)溶劑
• 染色時(shí)間可以根據(jù)情況調(diào)整，以免造成過度染色或背景過深
• 如果封閉欠佳，易造成背景顏色過深
• 本產(chǎn)品只能用于辣根過氧化酶（HRP）標(biāo)記的免疫印跡染色，不適合于組織化學(xué)沉淀反應(yīng)和原位雜交
• 如果染色過快或過深，以及染色沉淀物漂浮，建議稀釋一抗和二抗?jié)舛?/li>
• 固相膜染色后可在暗室里保存1周，但不能永久保存
• 本公司提供系列免疫印跡染色試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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