通用包涵體蛋白溶解試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

 

主要用途

 

通用包涵體蛋白溶解試劑是一種旨在使用化學(xué)方法快速充分裂解細(xì)菌細(xì)胞，萃取包涵體，通過(guò)常用陰離子去垢劑N-十二烷基肌氨酸鈉（Syrkosyl），使不溶性蛋白聚集體溶化復(fù)原成可溶性蛋白質(zhì)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)菌內(nèi)重組蛋白（融合蛋白）、尤其是不溶性蛋白的可溶性復(fù)原處理�？珊罄m(xù)用于特定蛋白純化、蛋白一維或二維電泳、西方雜交、免疫抗體和質(zhì)譜分析等等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，參數(shù)優(yōu)化，操作便捷，溶化效果理想。

 

技術(shù)背景

 

細(xì)菌作為宿主細(xì)胞廣泛用于重組蛋白的表達(dá)。在高度表達(dá)蛋白的純化過(guò)程中，80％的重組蛋白形成聚集體，而不可溶，變成包涵體（inclusion body）。包涵體內(nèi)的蛋白折疊異常，但是表達(dá)蛋白豐富，容易分離純化，不易被內(nèi)源性蛋白酶水解。通過(guò)特殊化學(xué)處理，包括變性劑、還原劑、鰲和劑等，能使不溶性狀態(tài)恢復(fù)為可溶性狀態(tài)，便于后續(xù)的各種生物學(xué)分析。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A） 50毫升

裂解液（Reagent B）     250微升

溶解液（Reagent C）       1毫升

強(qiáng)化液（Reagent D）       4毫升

保存液（Reagent E）  5毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書  1份

 

保存方式

 

保存裂解液（Reagent B）和溶解液（Reagent C）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

 

用戶自備

 

50毫升錐形離心管：用于細(xì)菌收集的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品保存的容器

2.2毫升離心管：用于樣品操作的容器

臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)菌沉淀收集

4℃微型臺(tái)式離心機(jī)：用于細(xì)菌清洗沉淀和收集蛋白

200瓦超聲儀：用于細(xì)菌細(xì)胞裂解

恒溫水�。河糜诜磻�(yīng)孵育

平式搖蕩儀：用于反應(yīng)孵育

實(shí)驗(yàn)步驟

 

• 準(zhǔn)備50毫升過(guò)夜培養(yǎng)的菌液（或OD600＝1.0）
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為3500g
• 小心抽去上清液
• 加入2毫升清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群
• 轉(zhuǎn)移到2.2毫升離心管
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心1分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心抽去上清液
• 加入1毫升清理液（Reagent A），混勻細(xì)胞顆粒群 
• 加入25微升裂解液（Reagent B），混勻
• 置于冰槽里孵育15分鐘
• 加入100微升溶解液（Reagent C），混勻
• （選擇步驟）置于200瓦超聲儀下，50％功率，猝擊2次，10秒1次，間隙30秒（注意：樣品管置于冰槽里）
• 放進(jìn)37℃恒溫水浴孵育2分鐘
• 室溫下，平放在平式搖蕩儀上孵育25分鐘，速度為50RPM
• 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415D）
• 小心移取上清液到15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）移取20微升進(jìn)行蛋白定量（建議使用 Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒－30030.1）
• （選擇步驟）移取40微升進(jìn)行SDS－PAGE電泳 
• 加入2毫升清理液（Reagent A）
• 加入330微升強(qiáng)化液（Reagent D）
• 加入400微升保存液（Reagent E），混勻
• 分裝到1.5毫升離心管，即刻放進(jìn)－70℃冰箱保存

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為10次操作
• 本產(chǎn)品用于一般包涵體的溶解處理
• 操作時(shí)須戴手套
• 操作時(shí)，注意溫度要求
• 本產(chǎn)品處理后，50毫升菌液通常可以獲得20至90％（平均50％）可溶性蛋白或1至5毫克重組蛋白，但是不同菌種的蛋白可溶性程度和產(chǎn)量會(huì)有差異
• 如果放在－70℃冰箱里儲(chǔ)存?zhèn)溆茫�避免反�?fù)凍融
• 如果復(fù)性效果欠佳，建議進(jìn)一步使用可溶性包涵體蛋白復(fù)性（化學(xué)稀釋）試劑盒－30044.4或包涵體蛋白復(fù)性（物理透析）試劑盒－30044.5
• 本公司提供系列包涵體蛋白處理試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無(wú)蛋白酶污染

上海一基實(shí)業(yè)有限公司多年專供：ELISA試劑盒，PCR恒溫?zé)晒鉁y(cè)試盒、朗道校準(zhǔn)品、校準(zhǔn)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品、抗體|抗原、生物試劑、動(dòng)物血清、人類CDNA、基因組DNA、MicroRNA產(chǎn)品、總RNA產(chǎn)品、人原代細(xì)胞裂解液、生物試劑、高端試劑等系列產(chǎn)品。如需產(chǎn)品詳細(xì)說(shuō)明等物理性質(zhì)信息請(qǐng)聯(lián)系客服為您查詢！質(zhì)量保證，價(jià)格優(yōu)惠，是國(guó)內(nèi)生物試劑權(quán)威的供應(yīng)商之一，專業(yè)經(jīng)銷生物科學(xué)領(lǐng)域的品牌試劑：Sigma試劑、ASROS試劑、AIFA試劑、alding試劑、Fisher試劑、日本MBL試劑、美國(guó)劍橋CIL氘代試劑、ATCC菌株等品牌產(chǎn)品。擁有齊全的生產(chǎn)和檢測(cè)設(shè)備，實(shí)施嚴(yán)格的管理制度和完善的質(zhì)量保證體系，為廣大客戶提供全面的技術(shù)支持和完善的售后服務(wù)。歡迎來(lái)電咨詢!