冰凍切片組織酸性磷酸酶（ACP）活性染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

冰凍切片組織酸性磷酸酶（ACP）活性染色試劑是一種旨在使用偶聯(lián)偶氮技術(shù)，在酸性環(huán)境下， 呈現(xiàn)出紫紅色沉淀現(xiàn)象，來分析組織樣本中酸性磷酸酶表達(dá)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動(dòng)物組織冰凍切片，同時(shí)也適合原生代或培養(yǎng)細(xì)胞的酶活性檢測�？捎糜诠琴|(zhì)細(xì)胞病理生理的研究的鑒定。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，靈敏牢固，顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

酸性磷酸酶（acid phosphatase；ACP；EC 3.1.3.2），是一種酸性水解酶（acid hydrolase）和去磷酸化酶，即磷酸單酯酶（phosphomonoesterase），在酸性環(huán)境下，水解磷酸單酯化合物而釋放出無機(jī)磷。正常情況下，位于溶酶體內(nèi)，作為溶酶體的分子標(biāo)記。在動(dòng)物體內(nèi)和植物中普遍存在。酸性磷酸酶按照組織分布、染色體定位、分子量、氨基酸序列、抗性特點(diǎn)等，分成不同的同工酶，其中包括酒石酸（tartrate）敏感/氟化物抗性的溶酶體型（lysosomal；100KD）、前列腺型（prostatic；100KD）和睪丸型（testicular），酒石酸抗性/氟化物敏感的紅細(xì)胞型（erythrocytic；18KD）、破骨細(xì)胞型（osteoclastic；37KD）和組織巨噬細(xì)胞型（macrophagic；37KD）。酸性磷酸酶異常與肝病、骨病、何杰金氏病（Hodgkin's disease）等有關(guān)。基于底物萘酚AS-MX磷酸鹽（naphthol AS-MX phosphate），在酸性環(huán)境下，酸性磷酸酶催化其水解，釋放出萘酚（naphthol-AS），進(jìn)而與重氮鹽耐曬紅紫（Fast red violet）偶聯(lián)，于是在酶的活動(dòng)處形成不溶性紫紅色沉淀的偶氮染料，由此證明酸性磷酸酶活性。其反應(yīng)體系為：

 

 ACP

naphthol AS-MX phosphate  ＋  H2O  →  naphthol AS  ＋  phosphate

 

naphthol AS  ＋  Fast red violet  →  azo dye

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A）   40毫升

固著液（Reagent B）   10毫升

反應(yīng)液（Reagent C）  200微升

染色液（Reagent D）   20毫升

產(chǎn)品說明書    1份

 

保存方式

 

保存反應(yīng)液（Reagent C）和染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

 

用戶自備

 

甲基綠復(fù)染試劑盒（40010）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

1.5毫升離心管：用于配制染色工作液的容器

恒溫培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的反應(yīng)液（Reagent C）和染色液（Reagent D）從－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化，并避光。然后移取1毫升染色液（Reagent D）到1.5毫升離心管，加入10微升反應(yīng)液（Reagent C），充分混勻后，標(biāo)記為染色工作液，室溫下，置入暗室。然后進(jìn)行下列操作：

• 樣本固著處理

 

• 取出待測的5至10微米厚的冰凍組織切片或細(xì)胞載玻片
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片或載玻片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去切片或載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固著液（Reagent B），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下，孵育2分鐘
• 小心移去切片或載玻片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片或載玻片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上200微升染色工作液，鋪滿整個(gè)切片或載玻片樣品表面
• 在37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育15分鐘；或直至可見黃色（注意：避免光照）
• 小心移去切片或載玻片上的染色工作液
• 室溫下，加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去切片或載玻片上的清理液（Reagent A）

 

• 樣本復(fù)染處理（選擇步驟）

 

• 樣本復(fù)染處理（甲基綠）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽性細(xì)胞呈現(xiàn)紫紅色，背景黃色，核為綠色

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為50次操作 
• 操作時(shí)，須帶手套
• 染色工作液配制后，即刻使用，不得超過1小時(shí)
• 染色工作液根據(jù)需要配制，每毫升，可以染色5個(gè)樣本
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 細(xì)胞固定建議不要超過2分鐘，以免酶活性降低
• 如果樣品中酶活性較低，細(xì)胞染色可以延長至45分鐘
• 細(xì)胞染色注意不要過度
• 直接封片處理，不要使用有機(jī)溶劑（乙醇、二甲苯等），否則會使染色褪色
• 細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列組織細(xì)胞酶活性染色試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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