細(xì)胞衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)
主要用途
細(xì)胞衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化脂溶性偶氮染料蘇丹黑B技術(shù),分析細(xì)胞樣品中早期脂褐素沉積現(xiàn)象,從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到黑色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老(replicative senescence)的分子特征來(lái)識(shí)別和探測(cè)衰老細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動(dòng)物細(xì)胞的的早期脂褐素檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。
技術(shù)背景
細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長(zhǎng)潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期,表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征,其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素(lipofusin),又稱為“磨損(wear and tear)”色素,是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素,主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見(jiàn)于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里,例如心臟、肝臟和神經(jīng)等,尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多,特別是萎縮的組織。脂褐素來(lái)自于氧化的蛋白和脂質(zhì),成為細(xì)胞衰老中后期的獨(dú)立指征。蘇丹黑B(SUDAN BLACK B),又稱為二氫二甲基苯基偶氮萘偶氮嵌間二氮雜苯(2,3-dihydro-2,2-dimethyl-6-(4-phynylazo)-1-naphthyl)azo)1H-perimidine),是一種脂溶性偶氮染料(LYSOCHROME DIAZO DYE)。其分子式為C26H24N4O,分子量為408.51。脂褐素分為早期和晚期,早期脂褐素的脂質(zhì)特性與脂溶性蘇丹黑B染料發(fā)生反應(yīng),顯示黑色。同時(shí)使紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液(Reagent A) 250毫升
固著液(Reagent B) 10毫升
染色液(Reagent C) 200毫升
澄清液(Reagent D) 120毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里; 染色液(Reagent C)和澄清液(Reagent D)避免光照,瓶蓋密閉;有效保證6月
用戶自備
小型染色缸:用于細(xì)胞染色操作
光學(xué)顯微鏡:用于觀察染色后的細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)步驟
操作一:細(xì)胞載玻片染色
- 取出待測(cè)的細(xì)胞載玻片或細(xì)胞涂片
- 小心加上200微升清理液(Reagent A)在載玻片上,鋪滿整個(gè)樣品表面
- 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A)
- 小心加上200微升固著液(Reagent B)在載玻片上,鋪滿整個(gè)樣品表面
- 在室溫下孵育15分鐘
- 小心移去載玻片上的固著液(Reagent B)
- 小心加上200微升清理液(Reagent A),清洗樣品表面
- 在室溫下孵育5分鐘
- 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A)
- 小心將載玻片置入50毫升染色液(Reagent C)的小型染色缸里(注意:確保載玻片浸泡在染色液(Reagent C))
- 室溫下孵育16小時(shí),避免光照,密閉瓶蓋
- 取出載玻片片,小心移去載玻片上的染色液(Reagent C)
- 室溫下,小心將載玻片置入新的50毫升澄清液(Reagent D)中5次(2秒/次)(注意:直至載玻片顏色呈現(xiàn)灰色)
- 輕輕移去載玻片上的澄清液(Reagent D),或空氣中晾干
- 小心加上200微升清理液(Reagent A)
- 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A)
- 放上蓋玻片或封片(水相或中性樹(shù)脂)
- 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:脂褐素陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)黑色,紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色,背景呈現(xiàn)不同程度灰色
操作二:24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色
- 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
- 每孔加入400微升清理液(Reagent A),清洗生長(zhǎng)中的細(xì)胞表面
- 小心抽去每孔里的清理液(Reagent A)
- 每孔加入400微升固著液(Reagent B),覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
- 在室溫下孵育15分鐘
- 小心抽去每孔里的固著液(Reagent B)
- 每孔加入400微升清理液(Reagent A),清洗細(xì)胞表面
- 在室溫下孵育5分鐘
- 小心抽去清理液(Reagent A)
- 每孔加入1毫升染色液(Reagent C),覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
- 室溫下孵育16小時(shí),避免光照,密閉蓋子(注意:避免干枯)
- 小心抽去染色液(Reagent C)
- 小心加上400微升澄清液(Reagent D),覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
- 室溫下孵育3分鐘
- 小心抽去澄清液(Reagent D)
- 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至15二次(注意:直至背景顏色呈現(xiàn)灰色)
- 小心加入400微升清理液(Reagent A)
- 小心抽去清理液(Reagent A)
- 小心加入200微升清理液(Reagent A)
- 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:脂褐素陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)黑色,紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色,背景呈現(xiàn)不同程度灰色
注意事項(xiàng)
- 本產(chǎn)品為50次(細(xì)胞載玻片)和25次(1個(gè)24孔板)操作
- 操作時(shí),須戴手套
- 本產(chǎn)品不適合于含有紅細(xì)胞的樣本
- 使用時(shí),避免污染母液
- 染色液(Reagent C)避免光照
- 染色時(shí),染色缸和培養(yǎng)板須密閉,至關(guān)重要
- 試劑溶液在樣品表面時(shí),避免有氣泡存在,同時(shí)確保鋪滿樣品表面
- 染色后澄清不宜過(guò)度,否則容易褪色
- 染色完成后,即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
- 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰
bio-equip.com
上海一基實(shí)業(yè)有限公司多年專供:ELISA試劑盒,PCR恒溫?zé)晒鉁y(cè)試盒、朗道校準(zhǔn)品、校準(zhǔn)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品、抗體|抗原、生物試劑、動(dòng)物血清、人類CDNA、基因組DNA、MicroRNA產(chǎn)品、總RNA產(chǎn)品、人原代細(xì)胞裂解液、生物試劑、高端試劑等系列產(chǎn)品。如需產(chǎn)品詳細(xì)說(shuō)明等物理性質(zhì)信息請(qǐng)聯(lián)系客服為您查詢!質(zhì)量保證,價(jià)格優(yōu)惠,是國(guó)內(nèi)生物試劑權(quán)威的供應(yīng)商之一,專業(yè)經(jīng)銷(xiāo)生物科學(xué)領(lǐng)域的品牌試劑:Sigma試劑、ASROS試劑、AIFA試劑、alding試劑、Fisher試劑、日本MBL試劑、美國(guó)劍橋CIL氘代試劑、ATCC菌株等品牌產(chǎn)品。擁有齊全的生產(chǎn)和檢測(cè)設(shè)備,實(shí)施嚴(yán)格的管理制度和完善的質(zhì)量保證體系,為廣大客戶提供全面的技術(shù)支持和完善的售后服務(wù)。歡迎來(lái)電咨詢!