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細(xì)胞衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色
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國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口:國(guó)產(chǎn)半年訪問(wèn):26
產(chǎn)地/品牌:上海一基產(chǎn)品類別:其他實(shí)驗(yàn)耗材
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細(xì)胞衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)(中文版)

主要用途

細(xì)胞衰老特異性早期脂褐素蘇丹黑原位染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化脂溶性偶氮染料蘇丹黑B技術(shù),分析細(xì)胞樣品中早期脂褐素沉積現(xiàn)象,從而在光學(xué)顯微鏡下觀察到黑色表達(dá)的細(xì)胞作為細(xì)胞復(fù)制性衰老(replicative senescence)的分子特征來(lái)識(shí)別和探測(cè)衰老細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動(dòng)物細(xì)胞的的早期脂褐素檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。  

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長(zhǎng)潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期,表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征,其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素(lipofusin),又稱為“磨損(wear and tear)”色素,是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素,主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見(jiàn)于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里,例如心臟、肝臟和神經(jīng)等,尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多,特別是萎縮的組織。脂褐素來(lái)自于氧化的蛋白和脂質(zhì),成為細(xì)胞衰老中后期的獨(dú)立指征。蘇丹黑B(SUDAN BLACK B),又稱為二氫二甲基苯基偶氮萘偶氮嵌間二氮雜苯(2,3-dihydro-2,2-dimethyl-6-(4-phynylazo)-1-naphthyl)azo)1H-perimidine),是一種脂溶性偶氮染料(LYSOCHROME DIAZO DYE)。其分子式為C26H24N4O,分子量為408.51。脂褐素分為早期和晚期,早期脂褐素的脂質(zhì)特性與脂溶性蘇丹黑B染料發(fā)生反應(yīng),顯示黑色。同時(shí)使紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色。

  

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液(Reagent A)       250毫升

固著液(Reagent B)   10毫升

染色液(Reagent C)  200毫升

澄清液(Reagent D)  120毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)       1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里; 染色液(Reagent C)和澄清液(Reagent D)避免光照,瓶蓋密閉;有效保證6月

 

用戶自備

 

小型染色缸:用于細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡:用于觀察染色后的細(xì)胞

 

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

操作一:細(xì)胞載玻片染色

 

  • 取出待測(cè)的細(xì)胞載玻片或細(xì)胞涂片 
  • 小心加上200微升清理液(Reagent A在載玻片上,鋪滿整個(gè)樣品表面
  • 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A
  • 小心加上200微升固著液(Reagent B在載玻片上,鋪滿整個(gè)樣品表面
  • 在室溫下孵育15分鐘
  • 小心移去載玻片上的固著液(Reagent B
  • 小心加上200微升清理液(Reagent A),清洗樣品表面
  • 在室溫下孵育5分鐘
  • 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A
  • 小心將載玻片置入50毫升染色液(Reagent C的小型染色缸里(注意:確保載玻片浸泡在染色液(Reagent C
  • 室溫下孵育16小時(shí),避免光照,密閉瓶蓋
  • 取出載玻片片,小心移去載玻片上的染色液(Reagent C
  • 室溫下,小心將載玻片置入新的50毫升澄清液(Reagent D中5次(2秒/次)(注意:直至載玻片顏色呈現(xiàn)灰色
  • 輕輕移去載玻片上的澄清液(Reagent D),或空氣中晾干 
  • 小心加上200微升清理液(Reagent A
  • 小心移去載玻片上的清理液(Reagent A
  • 放上蓋玻片或封片(水相或中性樹(shù)脂)
  • 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:脂褐素陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)黑色,紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色,背景呈現(xiàn)不同程度灰色

 

操作二:24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

 

  • 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
  • 每孔加入400微升清理液(Reagent A,清洗生長(zhǎng)中的細(xì)胞表面
  • 小心抽去每孔里的清理液(Reagent A
  • 每孔加入400微升固著液(Reagent B,覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
  • 在室溫下孵育15分鐘
  • 小心抽去每孔里的固著液(Reagent B
  • 每孔加入400微升清理液(Reagent A,清洗細(xì)胞表面
  • 在室溫下孵育5分鐘
  • 小心抽去清理液(Reagent A
  • 每孔加入1毫升染色液(Reagent C,覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
  • 室溫下孵育16小時(shí),避免光照,密閉蓋子(注意:避免干枯
  • 小心抽去染色液(Reagent C
  • 小心加上400微升澄清液(Reagent D,覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
  • 室溫下孵育3分鐘
  • 小心抽去澄清液(Reagent D
  • 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至15二次(注意:直至背景顏色呈現(xiàn)灰色
  • 小心加入400微升清理液(Reagent A
  • 小心抽去清理液(Reagent A
  • 小心加入200微升清理液(Reagent A
  • 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察:脂褐素陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)黑色,紅細(xì)胞呈現(xiàn)黑色,背景呈現(xiàn)不同程度灰色

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為50次(細(xì)胞載玻片)和25次(1個(gè)24孔板)操作
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 本產(chǎn)品不適合于含有紅細(xì)胞的樣本
  • 使用時(shí),避免污染母液
  • 染色液(Reagent C)避免光照
  • 染色時(shí),染色缸和培養(yǎng)板須密閉,至關(guān)重要
  • 試劑溶液在樣品表面時(shí),避免有氣泡存在,同時(shí)確保鋪滿樣品表面
  • 染色后澄清不宜過(guò)度,否則容易褪色
  • 染色完成后,即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
  • 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰 
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