細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素高碘酸希爾法品紅亞硫酸鹽原位染色試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書（中文版）

 

主要用途

細(xì)胞衰老特異性晚期脂褐素高碘酸希爾（PAS）法品紅亞硫酸鹽（FUCHSIN SULFITE）原位染色試劑是一種旨在通過(guò)高碘酸希爾染料與細(xì)胞內(nèi)晚期狀態(tài)自發(fā)氧化后的蛋白和脂質(zhì)發(fā)生反應(yīng)， 產(chǎn)生品紅色或紫紅色，來(lái)分析細(xì)胞樣本中晚期脂褐素成分，作為細(xì)胞復(fù)制性衰老（replicative senescence）的分子特征來(lái)識(shí)別和探測(cè)衰老細(xì)胞的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于動(dòng)物細(xì)胞的脂褐素檢測(cè)。廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞復(fù)制性衰老是細(xì)胞控制其生長(zhǎng)潛能的保障機(jī)制。衰老細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1期，表現(xiàn)出細(xì)胞扁平、脹大、顆粒增多的形態(tài)特征，其中脂褐素顆粒聚集增多成為細(xì)胞衰老的特征性生物學(xué)標(biāo)記。脂褐素（lipofusin），又稱為“磨損（wear and tear）”色素，是一種細(xì)胞內(nèi)與年齡相關(guān)的棕黃色熒光胞漿顆粒色素，主要在有絲分裂后細(xì)胞的繼發(fā)性溶酶體內(nèi)。脂褐素常見(jiàn)于老年人的永恒性非分裂性組織細(xì)胞里，例如心臟、肝臟、神經(jīng)和腎上腺皮質(zhì)的網(wǎng)狀帶等，尤其在衰老誘導(dǎo)的細(xì)胞退變中聚集增多，特別是萎縮的組織。脂褐素來(lái)自于氧化的蛋白和脂質(zhì)，是細(xì)胞中的自噬溶酶體酶未能將這些細(xì)胞碎片消化掉，進(jìn)而發(fā)生某些化學(xué)物理變化而形成了一種不溶性小體沉淀而成，成為細(xì)胞衰老中后期的獨(dú)立指征。脂褐素分為早期和晚期，晚期的脂褐素氧化后產(chǎn)生的乙醛基團(tuán)，與希爾試劑（Schiff’s Reagent），即品紅亞硫酸鹽染料（fuchsin sulfite）發(fā)生反應(yīng)，呈現(xiàn)品紅色（magenda）或紫紅色，表明脂褐素陽(yáng)性。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A）  250毫升

固著液（Reagent B）   10毫升

氧化液（Reagent C）   10毫升

染色液（Reagent D）   10毫升

平衡液（Reagent E）   30毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent D），嚴(yán)格密封瓶口，避免光照；氧化液（Reagent C）和染色液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

 

用戶自備

 

蘇木素復(fù)染試劑盒（80050）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

小型染色缸：用于細(xì)胞染色操作

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

操作一：細(xì)胞載玻片染色

 

• 樣本氧化處理

 

• 取出待測(cè)的細(xì)胞載玻片或細(xì)胞涂片 
• 小心加上200微升清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升固著液（Reagent B）在載玻片上，鋪滿整個(gè)樣品表面
• 在室溫下孵育15分鐘
• 小心移去載玻片上的固著液（Reagent B）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 小心加上200微升氧化液（Reagent C），鋪滿整個(gè)樣品表面
• 室溫下，孵育10分鐘
• 小心移去載玻片上的氧化液（Reagent C）
• 小心加上200微升清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13至14一次

二、樣本染色處理

• 小心加上200微升染色液（Reagent D），鋪滿整個(gè)載玻片樣品表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見(jiàn)深紅色
• 小心移去載玻片上的染色液（Reagent D）
• 小心加上200微升平衡液（Reagent E），鋪滿整個(gè)載玻片樣品表面
• 室溫下孵育30秒
• 小心移去載玻片上的平衡液（Reagent E）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至6二次
• 室溫下，小心將載玻片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育5分鐘
• 小心移去載玻片上的清理液（Reagent A）

 

三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

 

• 樣本復(fù)染處理（建議使用蘇木素復(fù)染試劑盒－80050）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：呈現(xiàn)大小不一的紫紅色或粉紅色顆粒為脂褐素陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色（復(fù)染）

 

 

 

操作二：24孔細(xì)胞培養(yǎng)板染色

 

一、樣本氧化處理

 

• 小心抽去24孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗生長(zhǎng)中的細(xì)胞表面
• 小心抽去每孔里的清理液（Reagent A）
• 每孔加入400微升固著液（Reagent B），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 在室溫下孵育15分鐘
• 小心抽去每孔里的固著液（Reagent B）
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面
• 在室溫下孵育5分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 每孔加入400微升氧化液（Reagent C），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 在室溫下孵育10分鐘
• 小心抽去氧化液（Reagent C）
• 每孔加入400微升清理液（Reagent A），清洗細(xì)胞表面
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟13和14一次

二、樣本染色處理

• 小心加上400微升染色液（Reagent D），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下孵育30分鐘；或直至可見(jiàn)深紅色
• 小心抽去染色液（Reagent D）
• 小心加上400微升平衡液（Reagent E），覆蓋整個(gè)生長(zhǎng)表面
• 室溫下孵育30秒
• 小心抽去平衡液（Reagent E）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至6二次
• 小心加入400微升清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去清理液（Reagent A）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步8和10三次

 

三、 （選擇步驟）樣本復(fù)染處理

 

• 樣本復(fù)染處理（建議使用蘇木素復(fù)染試劑盒－80050）
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：呈現(xiàn)大小不一的紫紅色或粉紅色顆粒為脂褐素陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色（復(fù)染）

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為50次（細(xì)胞載玻片）和25次（1個(gè)24孔板）操作
• 本產(chǎn)品不適合于含有紅細(xì)胞的樣本
• 操作時(shí)，須帶手套
• 所有操作在室溫下進(jìn)行
• 氧化液（Reagent C）和染色液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全
• 染色液（Reagent D）出現(xiàn)沉淀，可以溫?zé)帷�攪拌或過(guò)濾后使用
• 染色液（Reagent D）須密封避光，如果變成紅色，則影響染色效果
• 試劑溶液在樣品表面時(shí)，避免有氣泡存在，同時(shí)確保鋪滿樣品表面
• 樣品染色避免過(guò)度，肉眼可見(jiàn)深紅色即可終止染色
• 建議使用蘇木素復(fù)染試劑盒（40011），增強(qiáng)染色對(duì)比度
• 細(xì)胞染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀察
• 本公司提供系列細(xì)胞衰老分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰 

上海一基實(shí)業(yè)有限公司多年專供：ELISA試劑盒，PCR恒溫?zé)晒鉁y(cè)試盒、朗道校準(zhǔn)品、校準(zhǔn)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品、抗體|抗原、生物試劑、動(dòng)物血清、人類CDNA、基因組DNA、MicroRNA產(chǎn)品、總RNA產(chǎn)品、人原代細(xì)胞裂解液、生物試劑、高端試劑等系列產(chǎn)品。如需產(chǎn)品詳細(xì)說(shuō)明等物理性質(zhì)信息請(qǐng)聯(lián)系客服為您查詢！質(zhì)量保證，價(jià)格優(yōu)惠，是國(guó)內(nèi)生物試劑權(quán)威的供應(yīng)商之一，專業(yè)經(jīng)銷生物科學(xué)領(lǐng)域的品牌試劑：Sigma試劑、ASROS試劑、AIFA試劑、alding試劑、Fisher試劑、日本MBL試劑、美國(guó)劍橋CIL氘代試劑、ATCC菌株等品牌產(chǎn)品。擁有齊全的生產(chǎn)和檢測(cè)設(shè)備，實(shí)施嚴(yán)格的管理制度和完善的質(zhì)量保證體系，為廣大客戶提供全面的技術(shù)支持和完善的售后服務(wù)。歡迎來(lái)電咨詢!