石蠟切片羅丹寧（RHODANINE）銅染色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版

主要用途

石蠟切片羅丹寧（RHODANINE）銅染色試劑是一種旨在使用標(biāo)準(zhǔn)化的化學(xué)脫蠟方法和羅丹寧結(jié)合銅蛋白反應(yīng)技術(shù)，分析存檔中的石蠟包埋的組織切片中銅沉積現(xiàn)象的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良、成功實(shí)驗(yàn)證明的。主要適用于石蠟包埋組織切片的銅分子檢測(cè)。廣泛用于肝組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

 

技術(shù)背景

 

細(xì)胞漿里含有以結(jié)合蛋白形式的銅分子，然而過(guò)多銅分子的存在將產(chǎn)生毒性作用，尤其在肝臟組織，導(dǎo)致急性肝炎、晚期肝纖維化和慢性漸進(jìn)性梗阻性黃疸等。遺傳性威爾遜氏癥（Wilson’s disease）為典型肝內(nèi)銅增多癥。羅丹寧（RHODANINE），一種雙位螫合劑（bidentate chelating agent），與銅蛋白具有強(qiáng)力親和性。一旦反應(yīng)，產(chǎn)生亮紅色或桔紅色沉積，以證明銅分子的存在。與紅氨酸染色比較，羅丹寧染色更為敏感。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

脫蠟液（Reagent A）         300毫升

補(bǔ)水液A（Reagent B）  100毫升

補(bǔ)水液B（Reagent C）  100毫升

補(bǔ)水液C（Reagent D）  100毫升

補(bǔ)水液D（Reagent E）  100毫升

清理液（Reagent F）   50毫升

染色液（Reagent G）   50毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)    1份

 

保存方式

 

保存在4℃冰箱里，密閉瓶蓋；染色液（Reagent G），避免光照； 有效保證6月

 

用戶(hù)自備

 

無(wú)離子水：用于制備染色工作液

蘇木素復(fù)染試劑盒（80067）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

小型染色缸：用于石蠟切片的去石蠟和染色操作

培養(yǎng)箱或烘箱：用于脫蠟或染色孵育操作

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀(guān)察分析

 

 

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

• 脫蠟處理

 

• 取出10片待測(cè)的10微米厚石蠟包埋的組織切片（注意：石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，此步很重要）
• （選擇步驟）放進(jìn)80℃烘箱，孵育30分鐘
• （選擇步驟）室溫下靜置15分鐘
• 按下表依次放進(jìn)小染色缸里孵育

 

染色缸	孵育時(shí)間
50毫升脫蠟液（Reagent A）	15分鐘
50毫升脫蠟液（Reagent A）	15分鐘
50毫升脫蠟液（Reagent A）	15分鐘
50毫升補(bǔ)水液A（Reagent B）	3分鐘
50毫升補(bǔ)水液B（Reagent C）	3分鐘
50毫升補(bǔ)水液C（Reagent D）	3分鐘
50毫升補(bǔ)水液D（Reagent E）	3分鐘

 

• 小心移去切片上的補(bǔ)水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5分鐘
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F） 

• 樣本染色處理

操作開(kāi)始前，將4℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent G）置入室溫下預(yù)熱。準(zhǔn)備1個(gè)50毫升小型染色缸，移取10毫升充分搖勻的染色液（Reagent G）到染色缸里，加入40毫升用戶(hù)自備的無(wú)離子水，渦旋混勻后，標(biāo)記為染色工作液，避免光照。然后進(jìn)行下列操作。

• 小心將切片置入50毫升染色工作液中（注意：確保整個(gè)切片樣品浸泡在工作液里）
• 在60℃培養(yǎng)箱里孵育3小時(shí)；或直至可見(jiàn)紅色
• 取出切片，小心移去切片上的染色工作液 
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟4至5二次 

 

 

三、 樣本復(fù)染處理

 

• （選擇步驟）樣本復(fù)染處理（蘇木素）
• 小心加上200微升補(bǔ)水液B（Reagent C）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的補(bǔ)水液B（Reagent C）
• 小心加上200微升補(bǔ)水液A（Reagent B）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的補(bǔ)水液A（Reagent B）
• 小心加上200微升脫蠟液（Reagent A）在切片上，鋪滿(mǎn)整個(gè)切片樣品表面
• 小心移去切片上的脫蠟液（Reagent A）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察：銅沉積陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)亮紅色或磚紅色或桔紅色（如果復(fù)染：細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色）

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 試劑具有揮發(fā)性，注意用后密閉瓶蓋
• 石蠟包埋前，組織切片須用10％甲醛4℃條件下，固定16小時(shí)，否則造成樣品支離破碎
• 樣品染色避免過(guò)度，期間可以在顯微鏡下觀(guān)察染色程度 
• 可以置于37℃培養(yǎng)箱里孵育16小時(shí)
• 染色液（Reagent G）具有不溶性顆粒，使用前，須搖勻，使顆粒均勻分布在溶液里
• 染色工作液不宜長(zhǎng)期久放
• 正常肝或脾臟組織含有大量銅，可以作為陽(yáng)性對(duì)照
• 低濃度銅的組織染色后，會(huì)出現(xiàn)輕度褪色現(xiàn)象
• 建議使用蘇木素復(fù)染試劑盒（80067）
• 封片前使用脫蠟液（Reagent A）透明處理，可能會(huì)出現(xiàn)褪色
• 染色完成后，即刻進(jìn)行光學(xué)顯微鏡觀(guān)察 
• 本公司提供系列組織細(xì)胞金屬元素染色試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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