通用型HRP-DAB底物顯色試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)（中文版）

主要用途

通用型HRP-DAB底物顯色試劑是一種旨在通過(guò)過(guò)氧化物酶的催化，底物二氨基聯(lián)苯胺氧化形成棕褐色不溶性產(chǎn)物，以此鑒定過(guò)氧化物酶活性，進(jìn)而確定目標(biāo)分子表達(dá)的實(shí)驗(yàn)輔助試劑。其適用于辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記蛋白的免疫學(xué)檢測(cè)包括蛋白質(zhì)西方雜交和免疫化學(xué)，以及原位雜交染色等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，敏感度高，顯色清晰，重復(fù)性好。

 

技術(shù)背景

 

二氨基聯(lián)苯胺（3,3’-diaminobenzidine，DAB）是過(guò)氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在過(guò)氧化物酶的催化下，電子供體DAB底物在過(guò)氧化氫氧化下失去電子，而呈現(xiàn)出顏色變化和沉積，形成棕褐色不溶性產(chǎn)物，且不受乙醇影響。被用于檢測(cè)過(guò)氧化物酶的活性，靈敏度高，特異性好。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

染色液（Reagent A）  1瓶

稀釋液（Reagent B） 10毫升

反應(yīng)液（Reagent C）    90毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)      1份

 

保存方式

 

保存染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；染色液（Reagent A），避免光照，有效保證6月

 

用戶自備

 

甲基綠復(fù)染試劑盒（40010）或蘇木素復(fù)染試劑盒（80050）：用于常規(guī)染色后復(fù)染

磷酸緩沖液（12033.1）：用于清洗樣品

15毫升錐形離心管：用于染色工作液配制的容器

平式搖蕩儀：用于孵育和混勻反應(yīng)

2.2毫升離心管：用于配制染色工作液的容器

光學(xué)顯微鏡：用于細(xì)胞染色后觀察分析

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

• 免疫印跡染色

 

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置于室溫下均衡溫度，然后加入10毫升稀釋液（Reagent B），使其充分溶解。分別移出1毫升溶解后的染色液（Reagent A）和9毫升反應(yīng)液（Reagent C）到15毫升錐形離心管，混勻后標(biāo)記為染色工作液，避免光照。溶解后的染色液（Reagent A）即刻放回－20℃冰箱里。然后進(jìn)行下列操作。

 

• 準(zhǔn)備好含有待測(cè)蛋白的固相膜（5 X 8 cm2）：包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過(guò)氧化酶（HRP）標(biāo)記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 加入10毫升室溫預(yù)熱的染色工作液，鋪滿整個(gè)固相膜表面
• 置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育2至5分鐘，或直至棕褐色沉淀出現(xiàn)；避免光照
• 用鑷子夾起固相膜，放進(jìn)無(wú)離子水里清洗
• 空氣中晾干
• 數(shù)碼相機(jī)拍照記錄

 

• 免疫化學(xué)染色

 

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里試劑盒中的染色液（Reagent A）置于室溫下均衡溫度，然后加入10毫升稀釋液（Reagent B），使其充分溶解。分別移取200微升溶解后的染色液（Reagent A）和1.8毫升反應(yīng)液（Reagent C）到2.2毫升離心管，充分混勻，標(biāo)記為染色工作液，置于暗室。溶解后的染色液（Reagent A）即刻放回－20℃冰箱里。然后進(jìn)行下列操作：

 

• 準(zhǔn)備好含有待測(cè)蛋白的組織切片：包括固著、封阻、一抗（或生物素）處理、辣根過(guò)氧化酶（HRP）標(biāo)記的二抗（或鏈霉親和素）處理、清洗等步驟
• 室溫下，小心加上500微升的染色工作液，鋪滿整個(gè)切片樣品表面
• 室溫下孵育5至30分鐘，或直至樣本出現(xiàn)棕褐色
• 小心移去切片上的染色工作液
• 室溫下，小心將切片置入50毫升用戶自備的PBS緩沖液中浸泡5秒
• 小心移去切片上的PBS緩沖液
• （選擇步驟）進(jìn)行甲基綠復(fù)染（建議使用甲基綠復(fù)染試劑盒－40010或蘇木素復(fù)染試劑盒－80050）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學(xué)顯微鏡下觀察：陽(yáng)性呈現(xiàn)棕褐色

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品總量為10次（5 X 8 cm2膜片）或200次（組織切片）
• 用戶可以根據(jù)需求，調(diào)整試劑用量
• 操作時(shí)，須戴手套
• 染色時(shí)間根據(jù)情況調(diào)整，不能過(guò)長(zhǎng)，以免造成過(guò)度染色
• 如果封閉欠佳，易造成背景顏色過(guò)深
• 染色液具有毒性或刺激性
• 染色工作液不能儲(chǔ)存后使用；如果發(fā)現(xiàn)沉淀，不宜使用
• 固相膜染色后數(shù)小時(shí)將會(huì)褪色，不能永久存在
• 本產(chǎn)品只能用于辣根過(guò)氧化酶（HRP）標(biāo)記的雜交和沉淀反應(yīng)
• 染色后可用甲基綠或蘇木素復(fù)染，增強(qiáng)對(duì)照；建議使用甲基綠復(fù)染試劑盒－40010或蘇木素復(fù)染試劑盒－80050
• 本公司提供系列組化染色試劑

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰

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