RNA聚丙烯酰胺凝膠電泳試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

 RNA聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）試劑是一種旨在用于配制各種濃度，包括變性或非變性的聚丙烯凝膠，進(jìn)行常規(guī)低分子RNA 電泳的基本技術(shù)方法。產(chǎn)品即到即用，無菌過濾，無核酶污染，性能穩(wěn)定，高純均一，重復(fù)性好，簡(jiǎn)化操作，建立標(biāo)準(zhǔn)化體系。

 

技術(shù)背景

 

瓊脂糖（agarose）或聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamide gel electrophoresis；PAGE）是分離、識(shí)別和純化RNA分子的標(biāo)準(zhǔn)方法。聚丙烯酰胺凝膠電泳具有分辨力強(qiáng)，甚至可達(dá)1堿基差異；上樣量大（可達(dá)10毫克），不影響其分辨力；RNA回收純度極高。聚丙烯酰胺凝膠電泳通常分為非變性凝膠電泳（non-denaturing）和變性（denaturing）凝膠電泳。前者用于觀察RNA分子的構(gòu)象與遷移相關(guān)性或純化天然（native）分子；后者用于RNA序列分析、RNA酶保護(hù)檢測(cè)以及RNA標(biāo)記探針（包括同位素標(biāo)記）的純化。

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

基礎(chǔ)液（Reagent A）       50毫升

緩沖液（Reagent B）       20毫升

變性液（Reagent C）    100毫升

凝結(jié)液（Reagent D）      4毫升

穩(wěn)定液（Reagent E）    400微升

產(chǎn)品說明書                          1份

 

保存方式

 

保存凝結(jié)液（Reagent D）在-20℃冰箱里，變性液（Reagent C）保存在室溫下；其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保證3月

 

用戶自備

 

無離子水：用于稀釋緩沖體系

TBE緩沖液（12021）：用于電泳工作

直立電泳儀：用于電泳運(yùn)行

50毫升錐形離心管：用于配制膠體液的容器

 

實(shí)驗(yàn)操作

 

實(shí)驗(yàn)開始前，將冰箱里的試劑置于室溫下融化。然后進(jìn)行下列操作。

 

• 準(zhǔn)備好1個(gè)50毫升錐形離心管和清洗干凈的電泳槽玻璃板（注意：使用5％氯化鉀在甲醇溶液里清洗）
• 根據(jù)用戶的具體要求：分離RNA分子范圍，依次如下表所示加入試劑到50毫升錐形離心管里

 

百分比PAGE	基礎(chǔ)液（Reagent A）	緩沖液（Reagent B）	分離范圍（堿基）
3.5％	1.75毫升	2毫升	1000－2000
5％	2.5毫升	2毫升	80－500
8％	4毫升	2毫升	60－400
10％	5毫升	2毫升	40－200
12％	6毫升	2毫升	25－150
15％	7.5毫升	2毫升	6－100

 

• （選擇步驟）如果為變性電泳，加入10毫升變性液（Reagent C）
• 加入適量的用戶自備的無離子水至終容量為20毫升，混勻
• 加入400微升凝結(jié)液（Reagent D）
• 加入40微升穩(wěn)定液（Reagent E）
• 混勻后，即刻移入玻璃槽，避免氣泡
• 插入0.75毫米厚的10孔梳
• 在室溫下孵育45分鐘，或直至膠體凝結(jié)
• 將玻璃槽移入到電泳槽里
• 加入用戶自備的1倍TBE緩沖液
• 小心拔去10孔梳
• 用吸管或1毫升槍頭沖洗樣品孔備用
• 接上電源
• 電泳預(yù)運(yùn)行15分鐘，電壓為250伏
• 拔掉電源
• 再次用吸管或1毫升槍頭沖洗樣品孔
• 樣品準(zhǔn)備
• 上樣后繼續(xù)電泳運(yùn)行1小時(shí)，或直至溴酚藍(lán)（Bromophenol Blue）染料前沿到達(dá)膠底前1厘米處
• 進(jìn)行后續(xù)操作

 

注意事項(xiàng)

 

• 本產(chǎn)品為10次（10％PAGE）操作
• 操作時(shí)，須戴手套
• 基礎(chǔ)液（Reagent A）具有毒性，注意操作安全
• 使用時(shí)，避免對(duì)母液的污染
• 變性液（Reagent C）如有沉淀，可以加熱混勻后使用
• 建議將電泳玻璃板用乙醇、甲醇以及硅化液處理
• 本公司提供系列RNA電泳分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無核酶和蛋白酶污染

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