植物基因組DNA純化試劑盒（高多糖/酚）產(chǎn)品說明書（中文版）

 

主要用途

 

植物基因組DNA純化試劑（高多糖/酚）是一種旨在通過物理或化學破膜及離心處理方法，從植物細胞或組織中去除多糖和多酚之后， 進一步生物酶處理以獲得高質(zhì)量的基因組DNA的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種新鮮的含有大量多糖和酚的植物組織，包括葉片（leaf）、谷粒（grain）、種子（seed）等的核酸成分的分離。其應用于即時PCR、RLPF分析、測序、雜交、突變分析、克隆等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作簡單，純度產(chǎn)量高，重復性好。

 

技術(shù)背景

 

某些植物中含有高濃度多酚和多糖等大分子成分，干擾酶切反應和抑制PCR擴增。通過化學緩沖、大劑量特級酶、CTAB（cetyltrimethyl-ammonium bromide；十六烷基三甲基溴化銨）處理、特別萃取等技術(shù)方法有效地去除各種干擾因子。 

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

清理液（Reagent A）      100毫升

裂解液（Reagent B）  25毫升

酶解液（Reagent C）      2.5毫升

萃取液（Reagent D）          25毫升

濃縮液（Reagent E）   8毫升

沉淀液（Reagent F）          60毫升

凈化液（Reagent G）       50毫升

保存液（Reagent H）     3毫升

產(chǎn)品說明書      1份

 

保存方式

 

保存酶解液（Reagent C）和萃取液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；有效保證6月

 

用戶自備

 

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

2毫升離心管：用于DNA純化操作的容器

1.5毫升離心管：用于保存DNA

臺式離心機（例如EPPENDORF5810）：用于沉淀雜質(zhì)

微型臺式離心機（例如EPPENDORF5415）：用于沉淀核酸

渦旋震蕩儀：用于混勻反應物

恒溫水槽：用于孵育反應物

實驗步驟

 

• 準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定組織重量 
• （選擇步驟）放進預冷的15毫升錐形離心管
• （選擇步驟）加入適量的（200毫克組織需要2毫升）清理液（Reagent A）清洗1次
• 移入一個液氮凍存管
• 即刻放進液氮罐過夜
• 次日從液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
• 放進一個15毫升錐形離心管
• 加入500微升裂解液（Reagent B）
• 強力渦旋震蕩30秒
• 加入50微升酶解液（Reagent C），混勻（注意：使用前，先搖勻酶解液（Reagent C））
• 放進58℃恒溫水槽孵育60分鐘
• 置于冰槽里5分鐘
• 放進臺式離心機離心30分鐘，速度為3000g
• 小心移出上清液到1.5毫升離心管
• 放進微型臺式離心機離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415D）（注意：強化去除有色雜質(zhì)）
• 小心移出上清液到新的1.5毫升離心管
• 加入500微升萃取液（Reagent D）（注意：使用前，先搖勻萃取液）
• 渦旋震蕩30秒
• 放進微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415D）
• 小心移出500微升上層液相溶液到新的2毫升離心管
• 加入150微升濃縮液（Reagent E）
• 加入1.2毫升沉淀液（Reagent F）
• 上下傾倒混勻

24． 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415D）

• 小心抽掉上清液
• 加入1毫升凈化液（Reagent G）
• 放進微型臺式離心機離心3分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf5415D）
• 小心抽去上清液
• 空氣中晾干
• 加入50微升保存液（Reagent H）
• 放進4℃冰箱里過夜備用或即刻進行后續(xù)操作

 

注意事項

 

• 本產(chǎn)品為10次（1至5克樣品）或50次（100至300毫克樣品）操作
• 其它實際操作的植物組織重量或細胞量與試劑使用量按比例調(diào)整
• 操作時須戴手套
• 使用時，避免污染母液
• 酶解液（Reagent C）可以放進37℃恒溫水槽少許時間，使其凍融
• 通常情況下，100毫克植物組織可以獲得10至30微克DNA，但不同組織會有很大差異
• 本公司提供系列植物分子分析試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純度產(chǎn)量高

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