MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞）實驗，每一個步驟都要無菌操作。從開始的準(zhǔn)備工作，槍頭，EP管，PBS等的高壓；做實驗前紫外燈的照射，實驗人員佩戴口罩帽子穿超凈隔離服；所用試劑如果是很多人一起用，最好分裝，培養(yǎng)基最多一次配制一百到二百毫升，以免污染后浪費。不放心試劑的可以用小的培養(yǎng)皿驗菌。剩下的就是操作的規(guī)范性了，如果 是剛開始做，在進細(xì)胞間前應(yīng)該自己先把步驟捋一遍，保證心中有數(shù)，不會手忙腳亂。操作時注意細(xì)節(jié)，比如槍頭是否碰到不干凈的區(qū)域，立即換槍頭。不同細(xì)胞還要注意互相之間不能交叉的。

MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞）產(chǎn)品概述：

細(xì)胞名稱	MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞）
種屬	人
年齡（性別）	女；51歲
組織來源	乳腺腺癌，轉(zhuǎn)移性胸膜滲出液
生長特性	貼壁
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣
背景描述	MDA-MB-231細(xì)胞是從一名51歲的白人女性乳腺癌患者的胸水中分離建立的。MDA-MB-231細(xì)胞表達(dá)EGF受體、TGF-α受體和WNT7B癌基因。MDA-MB-231細(xì)胞在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中，能形成低分化腺癌(Ⅲ級)。
生長培養(yǎng)基	DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞）保種心得：

首先，細(xì)胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細(xì)胞，一種是復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞。前者是由液氮中取出細(xì)胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細(xì)胞復(fù)蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點，第一種方式的優(yōu)點是可以長途運輸，因為細(xì)胞在干冰中相對穩(wěn)定，一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細(xì)胞活性，但缺點是運輸成本高，且細(xì)胞復(fù)蘇是很復(fù)雜的過程，如果細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來源的問題還是復(fù)蘇操作的問題；而第二種方式的優(yōu)點是細(xì)胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細(xì)胞狀態(tài)，并且對運輸?shù)囊�求相對較低，缺點則是只適合短途運輸，因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清，細(xì)胞還是會不斷增殖，當(dāng)細(xì)胞長滿后，細(xì)胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細(xì)胞庫采購，一般采用第一種方法，既能適應(yīng)長途運輸，且大型細(xì)胞庫的凍存細(xì)胞質(zhì)量普遍較好，在良好的操作下復(fù)蘇成活率很高；如果是從國內(nèi)細(xì)胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細(xì)胞時能較好掌握細(xì)胞狀態(tài)，并且降低運輸成本。

MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞）分別針對兩種運輸方式來談下對新細(xì)胞的處理過程：

對于直接寄送凍存細(xì)胞的情況，首先要檢查的就是細(xì)胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經(jīng)沒有干冰，則細(xì)胞狀態(tài)可能會收到影響，建議盡快復(fù)蘇；如果有足量干冰，建議先轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，于第二天按正常流程復(fù)蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基，輕柔吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基；一般貼壁細(xì)胞在24h內(nèi)即可觀察到細(xì)胞貼壁，從而判斷細(xì)胞狀態(tài)，懸浮細(xì)胞則復(fù)蘇后即可觀察細(xì)胞狀態(tài)。對于凍存時間較長的細(xì)胞，可能需要傳代1到2次后，細(xì)胞才會調(diào)整到正常狀態(tài)，所以細(xì)胞復(fù)蘇后如果狀態(tài)不佳，不要灰心，仍要細(xì)心培養(yǎng)。

對于復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞的情況，則細(xì)胞收到后要先檢查細(xì)胞瓶是否有破損，細(xì)胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導(dǎo)致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細(xì)胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細(xì)胞穩(wěn)定后，觀察細(xì)胞狀態(tài)，并及時記錄，因為很多國內(nèi)細(xì)胞庫都是可以反饋細(xì)胞狀態(tài)的，如果收到時細(xì)胞狀態(tài)不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細(xì)胞如沒有異常，則盡快傳代并更換適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細(xì)胞一般都是第一次接觸，細(xì)胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間，消化時間過短或過長都會影響細(xì)胞狀態(tài)，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間，以便盡可能找到合適的消化時間。

MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞）本季度細(xì)胞銷售產(chǎn)品列表：

EC968    J45.01    人急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞    人    1640    懸浮
EC969    Sol8    小鼠骨骼肌肌肉母細(xì)胞    小鼠    DMEM    貼壁
EC970    TF-1    人白血病細(xì)胞    人    1640    懸浮
EC971    AEC16    人心肌細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC972    PEC-3M-2B4     人低轉(zhuǎn)移前列腺癌細(xì)胞    人    1640    貼壁
EC973    HLEpiEC    人晶狀體上皮細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC974    EC26    小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞    小鼠    1640    貼壁
EC975    EBEC-1    人肺鱗癌細(xì)胞    人    1640    貼壁
EC976    EEC109    人食管癌細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC977    16HBE    人支氣管上皮樣細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC978    ECLL     人慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞    人    1640    懸浮
EC979    BEP2D    人永生化支氣管上皮細(xì)胞    人    DMEM    貼壁
EC980    M1    人急性白血病細(xì)胞    人    1640    懸浮
EC981    MDA231-LM2      人高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞    人    L15    貼壁
EC982    HIT-T15    倉鼠beta胰島細(xì)胞    倉鼠    DMEM    貼壁
EC983    MPVEECs    小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞    小鼠    DMEM    貼壁
EC984    NG108-15    小鼠神經(jīng)瘤細(xì)胞    小鼠    EMEM    貼壁
EC985    HTSMEC    人氣管平滑肌細(xì)胞    人    DMEM    貼壁

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