RWPE-2（人前列腺正常細胞）實驗，每一個步驟都要無菌操作。從開始的準備工作，槍頭，EP管，PBS等的高壓；做實驗前紫外燈的照射，實驗人員佩戴口罩帽子穿超凈隔離服；所用試劑如果是很多人一起用，最好分裝，培養(yǎng)基最多一次配制一百到二百毫升，以免污染后浪費。不放心試劑的可以用小的培養(yǎng)皿驗菌。剩下的就是操作的規(guī)范性了，如果 是剛開始做，在進細胞間前應該自己先把步驟捋一遍，保證心中有數(shù)，不會手忙腳亂。操作時注意細節(jié)，比如槍頭是否碰到不干凈的區(qū)域，立即換槍頭。不同細胞還要注意互相之間不能交叉的。

RWPE-2（人前列腺正常細胞）產品概述：

細胞名稱	RWPE-2（人前列腺正常細胞）
種屬	人
年齡（性別）
組織來源
生長特性	貼壁
細胞形態(tài)	上皮細胞樣
背景描述	RWPE-2細胞是由Webber·M·M于1996年建株。
生長培養(yǎng)基	K-SFM＋0.05mg/ml BPE＋5ng/ml EGF＋1% P/S
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

RWPE-2（人前列腺正常細胞）保種心得：

首先，細胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細胞，一種是復蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細胞復蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點，第一種方式的優(yōu)點是可以長途運輸，因為細胞在干冰中相對穩(wěn)定，一般可以保證數(shù)周之內不影響細胞活性，但缺點是運輸成本高，且細胞復蘇是很復雜的過程，如果細胞復蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來源的問題還是復蘇操作的問題；而第二種方式的優(yōu)點是細胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細胞狀態(tài)，并且對運輸?shù)囊�求相對較低，缺點則是只適合短途運輸，因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清，細胞還是會不斷增殖，當細胞長滿后，細胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細胞庫采購，一般采用第一種方法，既能適應長途運輸，且大型細胞庫的凍存細胞質量普遍較好，在良好的操作下復蘇成活率很高；如果是從國內細胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態(tài)，并且降低運輸成本。

RWPE-2（人前列腺正常細胞）分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程：

對于直接寄送凍存細胞的情況，首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經(jīng)沒有干冰，則細胞狀態(tài)可能會收到影響，建議盡快復蘇；如果有足量干冰，建議先轉移至-80℃冰箱過夜，于第二天按正常流程復蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細胞的新鮮培養(yǎng)基，輕柔吹勻后轉移至培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基；一般貼壁細胞在24h內即可觀察到細胞貼壁，從而判斷細胞狀態(tài)，懸浮細胞則復蘇后即可觀察細胞狀態(tài)。對于凍存時間較長的細胞，可能需要傳代1到2次后，細胞才會調整到正常狀態(tài)，所以細胞復蘇后如果狀態(tài)不佳，不要灰心，仍要細心培養(yǎng)。

對于復蘇后寄送活細胞的情況，則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損，細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細胞穩(wěn)定后，觀察細胞狀態(tài)，并及時記錄，因為很多國內細胞庫都是可以反饋細胞狀態(tài)的，如果收到時細胞狀態(tài)不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細胞如沒有異常，則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細胞一般都是第一次接觸，細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間，消化時間過短或過長都會影響細胞狀態(tài)，甚至導致細胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間，以便盡可能找到合適的消化時間。

RWPE-2（人前列腺正常細胞）本季度細胞銷售產品列表：EC775    SNB19    人膠質母細胞瘤細胞    人    DMEM    貼壁
EC776    SK-LU-1    人低分化肺腺癌    人    EMEM    貼壁
EC777    NECI-H647    人非小細胞肺癌細胞    人    1640    貼壁
EC778    HAEEC    人主動脈內皮細胞    人    1640    貼壁
EC811    WRL68    人正常肝細胞    人    1640    貼壁
EC782    U266B1    人外周血B淋巴細胞    人    1640    懸浮
EC783    SNU-719    人胃癌細胞    人    1640    貼壁
EC812    MKN74    人胃癌細胞    人    1640    貼壁
EC784    HMEC    人腎小球系膜細胞    人    DMEM    貼壁
EC785    HBMEEC    人腦微血管內皮細胞    人    DMEM    貼壁
EC815    3T3-J2    小鼠胚胎成纖維細胞    小鼠    DMEM    貼壁
EC787    OPM-2    人骨髓瘤細胞    人    IMDM    懸浮
EC788    NS-1    小鼠骨髓瘤細胞    小鼠    IMDM    懸浮
EC789    NECI-H446    人小細胞肺癌細胞    人    1640    貼壁
EC790    NHA    人星形膠質細胞    人    DMEM    貼壁
EC791    ECOEC1    人卵巢癌細胞    人    1640    懸浮
EC792    HECGEC    人小腦顆粒細胞    人    DMEM    貼壁
EC816    BEL/FU    人血管內皮細胞    人    DMEM    貼壁

 

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