SK-N-BE(2)（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）實驗，每一個步驟都要無菌操作。從開始的準備工作，槍頭，EP管，PBS等的高壓；做實驗前紫外燈的照射，實驗人員佩戴口罩帽子穿超凈隔離服；所用試劑如果是很多人一起用，最好分裝，培養(yǎng)基最多一次配制一百到二百毫升，以免污染后浪費。不放心試劑的可以用小的培養(yǎng)皿驗菌。剩下的就是操作的規(guī)范性了，如果 是剛開始做，在進細胞間前應(yīng)該自己先把步驟捋一遍，保證心中有數(shù)，不會手忙腳亂。操作時注意細節(jié)，比如槍頭是否碰到不干凈的區(qū)域，立即換槍頭。不同細胞還要注意互相之間不能交叉的。

SK-N-BE(2)（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）產(chǎn)品概述：

細胞名稱	SK-N-BE(2)（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）
種屬	人
年齡（性別）	男；2歲
組織來源	腦；神經(jīng)母細胞瘤，骨髓轉(zhuǎn)移灶
生長特性	貼壁/懸浮
細胞形態(tài)	神經(jīng)母細胞樣
背景描述	SK-N-BE(2)神經(jīng)母細胞瘤細胞株是于1972年11月從一位多次化療及放療的擴散性神經(jīng)母細胞瘤患兒骨髓穿刺物中建立的；SK-N-BE(2)細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。有報道稱，SK-N-BE(2)細胞的飽和濃度超過1×10^6細胞/cm^2。SK-N-BE(2)細胞形態(tài)多樣，有的有長突觸、有的呈上皮細胞樣；SK-N-BE(2)細胞會聚集，形成團塊并浮起。
生長培養(yǎng)基	MEM/F12＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

SK-N-BE(2)（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）保種心得：

首先，細胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細胞，一種是復(fù)蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細胞復(fù)蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點，第一種方式的優(yōu)點是可以長途運輸，因為細胞在干冰中相對穩(wěn)定，一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細胞活性，但缺點是運輸成本高，且細胞復(fù)蘇是很復(fù)雜的過程，如果細胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來源的問題還是復(fù)蘇操作的問題；而第二種方式的優(yōu)點是細胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細胞狀態(tài)，并且對運輸?shù)囊�求相對較低，缺點則是只適合短途運輸，因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清，細胞還是會不斷增殖，當細胞長滿后，細胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細胞庫采購，一般采用第一種方法，既能適應(yīng)長途運輸，且大型細胞庫的凍存細胞質(zhì)量普遍較好，在良好的操作下復(fù)蘇成活率很高；如果是從國內(nèi)細胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態(tài)，并且降低運輸成本。

SK-N-BE(2)（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程：

對于直接寄送凍存細胞的情況，首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經(jīng)沒有干冰，則細胞狀態(tài)可能會收到影響，建議盡快復(fù)蘇；如果有足量干冰，建議先轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，于第二天按正常流程復(fù)蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細胞的新鮮培養(yǎng)基，輕柔吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基；一般貼壁細胞在24h內(nèi)即可觀察到細胞貼壁，從而判斷細胞狀態(tài)，懸浮細胞則復(fù)蘇后即可觀察細胞狀態(tài)。對于凍存時間較長的細胞，可能需要傳代1到2次后，細胞才會調(diào)整到正常狀態(tài)，所以細胞復(fù)蘇后如果狀態(tài)不佳，不要灰心，仍要細心培養(yǎng)。

對于復(fù)蘇后寄送活細胞的情況，則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損，細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導(dǎo)致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細胞穩(wěn)定后，觀察細胞狀態(tài)，并及時記錄，因為很多國內(nèi)細胞庫都是可以反饋細胞狀態(tài)的，如果收到時細胞狀態(tài)不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細胞如沒有異常，則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細胞一般都是第一次接觸，細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間，消化時間過短或過長都會影響細胞狀態(tài)，甚至導(dǎo)致細胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間，以便盡可能找到合適的消化時間。

SK-N-BE(2)（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）本季度細胞銷售產(chǎn)品列表：

EC761    Pan02    人胰腺癌細胞    人    1640    貼壁
EC675    NRK-49F    大鼠腎正常成纖維細胞    大鼠    EMEM    貼壁
EC632    JG    小鼠腎小球旁細胞    小鼠    DMEM    貼壁
EC641    SK-N-AS    人神經(jīng)母細胞瘤細胞    人    DMEM    貼壁
EC676    Mahlavu    人肝癌細胞    人    1640    貼壁
EC677    95EC    人肺巨細胞癌細胞(低轉(zhuǎn)移)    人    1640    貼壁
EC678    RS4;11    急性B淋巴細胞白血病細胞    人    1640    懸浮
EC697    697    人前B細胞白血病細胞    人    IMDM    懸浮
EC700    ML-2    人急性髓單核細胞白血病細胞    人    1640    懸浮
EC651    WiDr    人結(jié)直腸癌細胞    人    EMEM    貼壁
EC652    HECEC-1395    人乳腺癌細胞    人    1640    貼壁
EC679    MECF-12A    人乳腺癌細胞    人    EMEM    貼壁
EC680    EVSA-T    人乳腺癌細胞    人    DMEM    貼壁
EC701    BT-483    人乳腺導(dǎo)管癌細胞    人    DMEM    貼壁
EC702    MDA-MB-435    人乳腺癌細胞    人    L15    貼壁
EC703    MDA-MB-157    人乳腺癌細胞    人    L15    貼壁
EC681    ZR-75-1    人乳腺癌細胞    人    DMEM    貼壁

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