U-118 MG（人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤）實驗，每一個步驟都要無菌操作。從開始的準備工作，槍頭，EP管，PBS等的高壓；做實驗前紫外燈的照射，實驗人員佩戴口罩帽子穿超凈隔離服；所用試劑如果是很多人一起用，最好分裝，培養(yǎng)基最多一次配制一百到二百毫升，以免污染后浪費。不放心試劑的可以用小的培養(yǎng)皿驗菌。剩下的就是操作的規(guī)范性了，如果 是剛開始做，在進細胞間前應該自己先把步驟捋一遍，保證心中有數(shù)，不會手忙腳亂。操作時注意細節(jié)，比如槍頭是否碰到不干凈的區(qū)域，立即換槍頭。不同細胞還要注意互相之間不能交叉的。

U-118 MG（人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤）產(chǎn)品概述：

細胞名稱	U-118 MG（人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤）
種屬	人
年齡（性別）	男；50歲
組織來源	器官：大腦；腫瘤階段：按2007年的標準歸為IV期； 疾�。盒切文z質(zhì)母細胞瘤
生長特性	貼壁
細胞形態(tài)	混合形
背景描述	注意：據(jù)報道來自不同個體的膠質(zhì)母細胞瘤細胞株U-118 MG(HTB-15)和U-138 MG(HTB-16)有著一致的VNTR和相近的STR模式。U-118 MG(HTB-15)和U-138 MG(HTB-16)細胞遺傳學上很相似并有至少六個衍生標記染色體。這是1966-1969年間J·Ponten和其同事從惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤中構(gòu)建的細胞株中的一株(其它包括HTB-14、HTB-16和HTB-17)。1987年，用BM-Cycline培養(yǎng)6周去除了U-118 MG(HTB-15)細胞支原體污染。
生長培養(yǎng)基	DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

U-118 MG（人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤）保種心得：

首先，細胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細胞，一種是復蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細胞復蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點，第一種方式的優(yōu)點是可以長途運輸，因為細胞在干冰中相對穩(wěn)定，一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細胞活性，但缺點是運輸成本高，且細胞復蘇是很復雜的過程，如果細胞復蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來源的問題還是復蘇操作的問題；而第二種方式的優(yōu)點是細胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細胞狀態(tài)，并且對運輸?shù)囊�求相對較低，缺點則是只適合短途運輸，因為即便運輸時培養(yǎng)基中不添加血清，細胞還是會不斷增殖，當細胞長滿后，細胞的狀態(tài)會隨時間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細胞庫采購，一般采用第一種方法，既能適應長途運輸，且大型細胞庫的凍存細胞質(zhì)量普遍較好，在良好的操作下復蘇成活率很高；如果是從國內(nèi)細胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細胞時能較好掌握細胞狀態(tài)，并且降低運輸成本。

U-118 MG（人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤）分別針對兩種運輸方式來談下對新細胞的處理過程：

對于直接寄送凍存細胞的情況，首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經(jīng)沒有干冰，則細胞狀態(tài)可能會收到影響，建議盡快復蘇；如果有足量干冰，建議先轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，于第二天按正常流程復蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細胞的新鮮培養(yǎng)基，輕柔吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基；一般貼壁細胞在24h內(nèi)即可觀察到細胞貼壁，從而判斷細胞狀態(tài)，懸浮細胞則復蘇后即可觀察細胞狀態(tài)。對于凍存時間較長的細胞，可能需要傳代1到2次后，細胞才會調(diào)整到正常狀態(tài)，所以細胞復蘇后如果狀態(tài)不佳，不要灰心，仍要細心培養(yǎng)。

對于復蘇后寄送活細胞的情況，則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損，細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細胞瓶完好，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細胞穩(wěn)定后，觀察細胞狀態(tài)，并及時記錄，因為很多國內(nèi)細胞庫都是可以反饋細胞狀態(tài)的，如果收到時細胞狀態(tài)不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細胞如沒有異常，則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細胞一般都是第一次接觸，細胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時間，消化時間過短或過長都會影響細胞狀態(tài)，甚至導致細胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時間，以便盡可能找到合適的消化時間。

U-118 MG（人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤）本季度細胞銷售產(chǎn)品列表：

EC048    NIH/3T3    小鼠胚胎細胞    小鼠    DMEM    貼壁
EC049    Psi2 DAP    小鼠胚胎成纖維細胞    小鼠        
EC050    MS1    小鼠胰島內(nèi)皮細胞    小鼠        
EC051    SV40 MES 13    小鼠腎小球系膜細胞    小鼠        
EC052    OP9    小鼠骨髓基質(zhì)細胞    小鼠    1640    貼壁
EC053    C2C12    小鼠成肌細胞    小鼠    DMEM    貼壁
EC054    NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]    小鼠成纖維細胞    小鼠        
EC055    TM3    小鼠睪丸間質(zhì)細胞    小鼠        
EC056    B95-8    絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細胞    絨猴        
EC057    Mv.1.Lu(NBL-7)    貂肺上皮細胞    貂        
EC058    OK    負鼠腎細胞    負鼠        
EC059    NRK    大鼠腎細胞    大鼠        
EC060    NRK-52E    大鼠腎細胞    大鼠    DMEM    貼壁
EC061    BRL    大鼠肝細胞    大鼠        
EC062    BRL 3A    大鼠肝細胞    大鼠    DMEM    貼壁
EC063    NR8383    大鼠肺泡巨噬細胞    大鼠    F12K    貼壁+懸浮

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