西寶生物科技（上海）股份有限公司

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西寶生物（Seebio）--優(yōu)勢品牌 Wako、Jackson、Lumiprobe、APSC、Biomatrica、Elicity、Ludger、Laysan、Prospec、USP、Avanti、Megazyme、Chromadex、Cayman、LKT、TDB

西寶生物（Seebio）特色產(chǎn)品：糖類標(biāo)準(zhǔn)品，脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品，花青素標(biāo)準(zhǔn)品，類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品等食品分析標(biāo)準(zhǔn)品

背景：

任何處理的細(xì)胞培養(yǎng)都存在著微生物污染的風(fēng)險。細(xì)菌和真菌造成的污染比較容易檢測、預(yù)防以及去除, 然而支原體造成的污染不論是在發(fā)生率、檢測、預(yù)防還是去除上都更為困難。
有超過20種不同類型的支原體從細(xì)胞培養(yǎng)物中被分離出來, 但是最常見的, 占到分離品種80-90%的主要是M.arginini, M.fermentans, M.hyorhinis, M.orale和Acholeplasma laidlawii.

支原體污染的后果？

1. 細(xì)胞培養(yǎng)中副作用：改變生長特點(diǎn)、細(xì)胞膜組成、染色體結(jié)構(gòu)等等。

2. 不準(zhǔn)確或者錯誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3. 珍貴培養(yǎng)細(xì)胞的損失。

因此, 定期進(jìn)行支原體檢測, 確保無支原體的細(xì)胞培養(yǎng)體系, 最終才能獲得高質(zhì)量的、有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

所以，上海西寶生物科技有限公司（Seebio）隆重推薦MPBio高效的支原體“檢測”和“去除”系列產(chǎn)品，如下： 

093050044，支原體去除試劑-MYCOPLASMA REMOVAL AGENT（MRA）

具有很強(qiáng)的抑制支原體活性的能力，從被污染的培養(yǎng)細(xì)胞中徹底去除支原體。

MRA屬于抗生素喹啉家族的衍生物, 通過抑制支原體DNA旋轉(zhuǎn)酶來去除支原體污染, DNA旋轉(zhuǎn)酶是DNA復(fù)制過程中必不可少的酶類。 

 活性范圍廣

MRA的活性在細(xì)胞培養(yǎng)物中可以維持長達(dá)7天, 對多種支原體株系均有作用, 并且濃度達(dá)到0.5 μg/ml即可發(fā)揮功效。

作用濃度低，細(xì)胞毒性小

在推薦濃度下使用MRA, 細(xì)胞毒性極小, 因此也可以作為預(yù)防支原體污染使用的試劑。預(yù)防濃度為0.1 μg/ml即可。實(shí)驗(yàn)表明, 與其他品牌的同類產(chǎn)品相比, MP Biomedicals的MRA對正常培養(yǎng)的細(xì)胞沒有致死效應(yīng)。

防止支原體污染復(fù)發(fā)

一旦使用了MRA, 培養(yǎng)細(xì)胞就不會再受到同樣的支原體污染, 從而起到預(yù)防污染復(fù)發(fā)的效果。

使用方便

MRA使用非常方便, 只要添加到支原體污染的培養(yǎng)細(xì)胞中孵化一周即可。

MRA提供的濃度是即拆即用型, 室溫保存, 每瓶MRA含有5ml 4-oxo-quinoline-3-carboxylic acid衍生物 (濃度：50 μg/ml)。

References

1. Shubhra Singh & S. K. Puri & Kumkum Srivastava. Treatment and control of mycoplasma contamination in Plasmodium falciparum culture. Parasitol Res104:181–184, (2008).

2. O'Dea K.P., Pasvol G.: Optimal tumor necrosis factor induction by Plasmodium falciparum requires the highly localized release of parasite products. Infect. Immun., 71: 3155- 3164, (2003)

3. Rowe J.A., Scragg I.G., Kwiakowski D., Ferguson D.J.P., Carucci D.J., Newbold C.I. Implications of mycoplasma contamination in Plasmodium falciparum cultures and methods for its detection and eradication. Mol. Biochem. Parasitol., 92 : 177-180, (1998)

4. Peppel K., Jacobson A., Huang X., Murray J.P., Oppermann M., Freedman N.J. Overexpression of G protein-coupled receptor kinase-2 in smooth muscle cells atte-nuates mitogenic signaling via G protein-coupled and platelet-derived growth factor receptors Circulation, 102 : 793-799, (2000)

5. Trucco C., Javier Oliver F., De Murcia G., Menissier-de-Murcia J.: DNA repair defect in poly(ADP-ribose) polymerase-deficient cell lines. Nucleic Acid Res., 26 : 2644-2649, (1998).

093020000，支原體檢測試劑盒-IMMUMARK MYCOTEST (免疫熒光檢測法) 

  ImmuMark MycoTest 試劑盒是一款運(yùn)用免疫熒光方法檢測培養(yǎng)細(xì)胞中支原體污染的產(chǎn)品。該產(chǎn)品中使用的單抗CCM-2特異性針對最流行支原體株系中(包括Acholeplasma laidlawii, M. bovis M. hominis, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. fermentans, M. pulmonis, M. hyopneumoniae和M. salivarium等)的共同抗原。ImmuMark MycoTest 試劑盒提供兩種檢測方法。

直接檢測：利用熒光標(biāo)記的單抗CCM-2一步法快速篩選出可疑陽性。

間接檢測：利用熒光標(biāo)記的單抗CCM-2和FITC標(biāo)記的二抗-山羊抗小鼠IgG對極度敏感的支原體進(jìn)行檢測

直接法或間接法孵育樣品后, 用PBS沖洗掉多余試劑, 在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果(最大激發(fā)波長490nm, 平均發(fā)射波長 520nm, 放大倍率400~600X)。

結(jié)果

在感染細(xì)胞的邊緣或在細(xì)胞之間可以觀察到黃-綠熒光, 感染細(xì)胞呈現(xiàn)明亮的紅色。在多數(shù)情況下, 支原體都是在細(xì)胞表面的一點(diǎn)密集排列。

試劑盒組成

熒光標(biāo)記的CCM-2單抗-2ml

FITC標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG (二抗)-2ml

陽性樣本/陰性樣本對照玻片-2片

封固劑-2.5ml

093030000，支原體染色試劑盒-Mycoplasma Stain Kit

培養(yǎng)細(xì)胞中的細(xì)菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光學(xué)顯微鏡下可見, 但支原體污染在光學(xué)顯微鏡下不可見, 必須通過特定的檢測方法進(jìn)行檢測。

鑒別和確定支原體污染, 已知的方法有直接培養(yǎng)法, 支原體特異酶檢測, RNA標(biāo)記法, 放射自顯影法, PCR技術(shù)以及DNA熒光染色法。上述檢測方法中, 除DNA熒光染色法檢測外, 都需要較長的時間以及多種實(shí)驗(yàn)設(shè)備及試劑支持, 操作步驟也比較煩瑣。

DNA熒光染色檢測法的優(yōu)點(diǎn)是既靈敏, 又非常快速。有幾種DNA熒光染料如DAPI、氮芥喹吖因、二鹽酸喹吖因等, 但它們都不如Hoechst的熒光染色效果好。Hoechst染料的特點(diǎn)是緩慢淬火和最低的本底熒光。

MP Bio的支原體染色試劑盒(Mycoplasma Stain Kit)用于在培養(yǎng)細(xì)胞中原位染色檢測支原體或其它原核生物。該試劑盒的原理是DNA熒光染色檢測法, 采用的熒光染料為Hoechst 33258。Hoechst染色后在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果, 污染的類型可以根據(jù)其形態(tài)、大小以及其與培養(yǎng)的細(xì)胞的相互關(guān)系來確定。熒光顯微鏡下, 支原體是存在于胞質(zhì)中的大小均一的熒光小點(diǎn)或短棒(絲狀物), 而其他污染物的體積則會更大一些并且熒光更亮。

結(jié)果

樣本應(yīng)該在熒光顯微鏡下以400~1000X油鏡鏡頭觀察(激發(fā)波長：360nm；發(fā)射波長：490~500nm)。通過陽性和陰性對照玻片與結(jié)果的比較, 可以很容易的辨認(rèn)出支原體。

未污染培養(yǎng)：

 在未被污染的培養(yǎng)物中只有細(xì)胞核被染色, 偶爾會出現(xiàn)從死細(xì)胞或破損細(xì)胞中釋放的呈球形的微核或其他的核碎片,它們與支原體相比, 體積更大并且熒光更亮。

污染的培養(yǎng)：

被污染的培養(yǎng)中可以觀察到細(xì)胞核被許多熒光小亮點(diǎn)包圍著, 他們的直徑普遍在0.1~0.3μm之間并且具有多形性, 形態(tài)可以從球形一直到細(xì)絲狀。

試劑盒組成：

Hoechst染色33258-1x10ml

10X HBSS不含酚紅和碳酸氫鈉-1x10ml

封固劑-1x10ml

陽性/陰性對照玻片-5片