西寶生物科技（上海）股份有限公司

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西寶生物（Seebio）--優(yōu)勢(shì)品牌 Wako、Jackson、Lumiprobe、APSC、Biomatrica、Elicity、Ludger、Laysan、Prospec、USP、Avanti、Megazyme、Chromadex、Cayman、LKT、TDB

西寶生物（Seebio）特色產(chǎn)品：糖類標(biāo)準(zhǔn)品，脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品，花青素標(biāo)準(zhǔn)品，類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品等食品分析標(biāo)準(zhǔn)品

在研究體內(nèi)及體外的免疫系統(tǒng)時(shí)，分離淋巴細(xì)胞群是一個(gè)關(guān)鍵步驟。因?yàn)楝F(xiàn)在市場(chǎng)上并沒有針對(duì)B細(xì)胞的特異性抗血清，所以分離淋巴細(xì)胞中的T細(xì)胞并不是十分方便。T細(xì)胞尼龍毛分離法利用了尼龍毛對(duì)B細(xì)胞的親和力，從而使T細(xì)胞在沒有嚴(yán)重?fù)p傷的情況下達(dá)到的足夠的純度。因?yàn)檫@個(gè)方法不像流式和磁珠費(fèi)用昂貴，而且操作簡(jiǎn)便，所需要的條件也不高，是一種非常實(shí)用的方法。
首先要指出的是實(shí)驗(yàn)中所使用的是分離T細(xì)胞專用的尼龍毛(Nylon Fiber)，不是化工上的尼龍纖維，曾經(jīng)有人問過我這種問題，如果你買錯(cuò)了，可是做不出來的！
現(xiàn)在市面上有尼龍毛填料，也已經(jīng)有了商品化的尼龍毛柱子，這兩者的區(qū)別主要是以下兩點(diǎn)：1.商品化的柱子的填料量是已經(jīng)定好的，有一個(gè)確定的上樣量范圍。而自己買填料裝柱可以控制填料量，也就是可以控制上樣量，這對(duì)于樣本量非常少，或是樣本量非常大的實(shí)驗(yàn)需求非常合適。2.商品化的柱子已經(jīng)經(jīng)過了無菌處理(一般是輻射滅菌)，而自己裝柱當(dāng)然就要自己滅菌了。
操作方法：
1.秤取1.5g尼龍毛裝入20-30ml玻璃或一次性注射器內(nèi)(要可以滅菌的)，填料的體積控制在15毫升左右(注射器上有標(biāo)記，所以還是比較好控制的)，因?yàn)槟猃埫�的松緊關(guān)系到T細(xì)胞的回收率，所以要特別注意。注射器下端配接5厘米左右長(zhǎng)的帶有彈簧夾的橡皮管。

2. 加入大量的PBS平衡柱子后，用鋁箔包裹，并置于適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，高壓滅菌15分鐘。

（商品化尼龍毛柱以上步驟可以省略，經(jīng)過PBS平衡后可以直接進(jìn)行下列步驟。）

3. 滅菌的尼龍毛柱垂直固定后放于超凈臺(tái)內(nèi)，頂部以鋁箔覆蓋，避免污染。

4. 注射器下端，橡皮管，彈簧夾用無水酒精消毒。打開彈簧夾調(diào)節(jié)流速在大約3-4ml/min。

5.首先，加入3-4倍柱體的無血培養(yǎng)基平衡隨后，之后加入相同體積的含有血清的培養(yǎng)基平衡（上述培養(yǎng)基都要預(yù)熱），最后等培養(yǎng)基頁面接近柱填料頁面時(shí)，關(guān)閉彈簧夾。
6. 樣本細(xì)胞懸浮液濃度控制在5×108cells/ml的，上樣量一般是1/3-1/5柱體積。樣品加入之后，再加入少量培養(yǎng)液，然后關(guān)閉彈簧夾。
 

7. 柱上覆蓋鋁箔，移置于消毒過的容器中，37℃孵育1小時(shí)。此過程中柱子必須要保持垂直狀態(tài)。

8. 從培養(yǎng)箱中拿出柱子，置于超凈臺(tái)內(nèi)，除去鋁箔。接上按照4.中的方法消毒的彈簧夾和橡皮管，加入適當(dāng)體積經(jīng)37℃預(yù)熱的培養(yǎng)基，打開彈簧夾控制流速在3-4 mL/min，流出約5ml之后，流出的培養(yǎng)液基變得不透明，此時(shí)其中含有T細(xì)胞，收集這一部分培養(yǎng)基。

9. 基本上何時(shí)結(jié)束收集取決于流出液體中細(xì)胞的濃度，實(shí)際上，收集的量達(dá)到一個(gè)柱體積時(shí)就可以停止收集，因?yàn)榧词故占�更多的量，回收率幾乎不�?huì)增加。

10 。上述操作后，細(xì)胞的

回收率為： 15 20 ％

T細(xì)胞含量： 85 95 ％

B細(xì)胞污染率： 1 5 ％

多數(shù)細(xì)胞被確定為T細(xì)胞。

（注）收集粘附于尼龍毛上的細(xì)胞時(shí)，將T細(xì)胞收集完畢后的尼龍毛再無菌操作的狀態(tài)下取出，轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜髦校�用鑷子小心的將尼龍毛松開，粘附的細(xì)胞可以洗到培養(yǎng)基中�；蛘邔⒆⑸淦餍静迦胱⑸淦鲀�(nèi)，通過壓力使的粘附的細(xì)胞隨著液體流出。
以上資料參考日本和光純藥的尼龍毛柱產(chǎn)品說明書編寫。如要任何問題或需要請(qǐng)聯(lián)系：
品牌     品名                   規(guī)格        
Wako T細(xì)胞尼龍毛柱 0.5g*10(推薦用于小鼠脾臟)
Wako T細(xì)胞尼龍毛柱L型 1g*10(推薦用于大鼠脾臟、人或兔子的外周血)
Wako T細(xì)胞尼龍毛 2g*5(可按照自己的需要裝柱，控制上樣量)

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尼龍毛：

146-04231 Nylon Fiber for T-cell Separation 2 g x5
142-04233 Nylon Fiber for T-cell Separation 100 g Wako
IMMUNOLOGY CELL SEPARATION A simple method for the preparation of highly enriched, unselected and unaltered populations of T cells has been described by Julius. By packing nylon wool fiber into columns, efficient isolation of T cells from antisera without B cell contamination is possible. Wako has improved upon the same method, offering nylon wool fiber which is free of all toxic substances, In addition, pre-washed, pre-packaged nylon wool fiber comes ready to use in sterilized 10cc columns, saving hours of preparation. Prepackaged columns also eliminate variability in column packing, insuring consistent cell elution rates. Reference: Julius, M.G., E. Simpson, and R.A. Herzenberg: Eur. J. Immun., 3, 645-649 (1973).

T細(xì)胞分離用尼龍毛柱
143-07041 Nylon Fiber Column T (L-Type) for T-cell Separation 1 g x10
147-06721 Nylon Fiber Column T for T-cell Separation 0.5 g x10
詳細(xì)信息：
This product is for research use only. Do not administer it to human.

上海西寶生物提供 兩種規(guī)格的尼龍毛柱

Nylon Fiber Column T is for separation of T-cells of mouse lymphocytes and the L-type is for that of a large amount of suspended solution, especially rat splenic lymphocytes and the L-Type is for that of a large amount of suspended solution, especially rat splenic lymphocytes, and peripheral blood lymphocytes of rabbit and human.

Features:
1. Simple procedure.
2. High reproducibility.
3. Sterilized.
4. Using a high quality nylon fiber.

Cell Recovery:
13 - 25% (mouse) when Nylon Fiber Column T was used.
25 - 35% (rat), 20 - 30% (human) and 25 - 30% (rabbit) when Nylon Fiber Column T (L-Type) was used.

B-cell contamination:
Less than 15%