世界首個(gè)質(zhì)譜掃描31種人乳頭瘤病毒HPV雙基因分型問世

經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院和第四軍醫(yī)大學(xué)與美國西格諾公司合作，聯(lián)合研究開發(fā)的多重PCR-Mass質(zhì)譜掃描法，于2012年11月9日被美國臨床微生物雜志Journal of Clinical Microbiology接收網(wǎng)上發(fā)表。

該研究揭示，在女性宮頸癌中HPV檢出率>97%，主要為15種高危型；而男同性戀M(fèi)SM者中，HPV感染型已經(jīng)超過30種型，特別是>10種型的高混合型感染的嚴(yán)重程度，已經(jīng)遠(yuǎn)超過女性的>5種型的程度，其對健康的影響目前還鮮為人知，應(yīng)當(dāng)受到高度關(guān)注。

該方法用于檢測世界衛(wèi)生組織國際腫瘤研究機(jī)構(gòu)（WHO_ IARC）公布的30種與婦女子宮頸病變相關(guān)HPV基因型,包括：15種致癌高危型：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，82；3種可能致癌高危型：26，53，66；及12種低危型：6，11，40，42，43，44，54，61，70，

72，81/CP8304和89/CP6108型；以及男性同性戀中高發(fā)的84型。檢測探針針對兩個(gè)基因區(qū)，致癌性早期轉(zhuǎn)錄E6基因和衣殼蛋白晚期轉(zhuǎn)錄L1基因，避免了因病毒整合、變異或樣本降解而造成的假陰性問題。經(jīng)兩輪擴(kuò)增和采用先進(jìn)的飛行質(zhì)譜MALDI掃描，軟件自動分析報(bào)告HPV基因型結(jié)果，避免了人為目測判斷造成的誤差，檢測靈敏度高達(dá)單拷貝/反應(yīng)。

經(jīng)對200份同性戀肛拭子DNA標(biāo)本檢測，發(fā)現(xiàn)64.5%(129/200) HPV陽性，其中混合型感染者51.9% (67/129)，最高達(dá)12種，總共檢出31種HPV類型。

經(jīng)對135例宮頸癌組織標(biāo)本作對比實(shí)驗(yàn)，質(zhì)譜法與凱普法(GA，CE,SFDA認(rèn)證) 分別檢出HPV基因型為15種和11種，陽性率為97% (131/135) 和90.4% (122/135)。質(zhì)譜法與凱普法所檢測的陽性標(biāo)本122例和陰性標(biāo)本4例完全吻合，用測序法補(bǔ)充驗(yàn)證9例凱普檢測陰性的標(biāo)本，結(jié)果與質(zhì)譜法完全一致。質(zhì)譜法與凱普法分別檢出混合型感染者55.6%(75/135) 和25.2% (34/135)，發(fā)現(xiàn)最高混合型分別為6種和3種HPV類型。

該方法的主要優(yōu)勢：

高特異性：在高重?cái)?shù)引物設(shè)計(jì)、試劑遴選及特異甄別等方面獨(dú)具匠心，徹底解決了目前多重探針混合，識別相似基因序列易產(chǎn)生交叉錯(cuò)配的假陽性問題。經(jīng)幾千例樣本測試和測序比對，特異性達(dá)100%。

高靈敏度：雙基因探針、兩輪PCR擴(kuò)增和高特異性探針單堿基延伸反應(yīng)，飛行質(zhì)譜掃描，顯著提高了檢測致病HPV基因型的靈敏度，解決了現(xiàn)行試劑盒中因采用E或L單基因探針檢測而出現(xiàn)的結(jié)果不一致性及其所致的假陰性問題，達(dá)到每個(gè)反應(yīng)單拷貝水平。

防污染：封閉式單孔完成全部反應(yīng)，無須清洗，產(chǎn)物可即時(shí)降解。

通量靈活：每天檢測10-1000份樣本，每板可檢測7800重反應(yīng)。

高自動化：軟件實(shí)時(shí)判讀檢測結(jié)果，避免了目測判讀的人為誤差。

低成本：毋需熒光標(biāo)記，5µL反應(yīng)體系，試劑用量低。

本方法廣泛適用于轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究的各種男女性臨床樣本：血液、尿液、細(xì)胞、咽拭子、肛拭子、新鮮組織及福爾馬林固定石蠟包埋組織中31種HPV病毒DNA的分型測試。

本項(xiàng)服務(wù)將首先在國內(nèi)首批醫(yī)學(xué)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室北京德易醫(yī)檢開展。

服務(wù)地址：北京市西城區(qū)新街口外大街8號  

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