CGS Exo-spin™ 試劑盒是專(zhuān)用于提取細(xì)胞上清、尿液、唾液、血清、血漿等其他生物體液中外泌體的試劑盒， 通過(guò)沉淀法和SEC法（尺寸排阻色譜）即可從樣本中獲取大量結(jié)構(gòu)完整的外泌體，操作快速簡(jiǎn)便，收獲外泌體產(chǎn)率高、純度高。相較于傳統(tǒng)的超速離心法，大量節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

試劑盒選用——細(xì)胞上清

 

01 Exo-spin™ 外泌體純化試劑盒如何保存？

產(chǎn)品常溫運(yùn)輸。收到產(chǎn)品后，請(qǐng)于4℃保存，可以穩(wěn)定保存一年。

02 Exo-spin™ 外泌體純化試劑盒中使用哪種方法分離外泌體?

Exo-spin™ 試劑盒技術(shù)結(jié)合沉淀法和尺寸排阻色譜法(SEC)。
若樣品不需要沉淀，也可單獨(dú)使用SEC色譜柱。

03 什么是沉淀法?

沉淀法是利用沉淀反應(yīng)物將組分從樣品中以固體物質(zhì)分離。Exo-spin™ 技術(shù)使用這種方法在SEC色譜柱分離前濃縮外泌體。

04 什么是尺寸排阻色譜(SEC)?

SEC尺寸排阻色譜法（Size Exclusion Chromatography）是一種根據(jù)粒徑大小分離溶液中顆粒的方法，SEC柱采用樹(shù)脂填充的多孔球形珠。當(dāng)含有外泌體的溶液加入到SEC柱中時(shí)，較小的顆粒將會(huì)被捕獲在孔中，而較大的分子則不會(huì)進(jìn)入孔中先被洗脫。因此首先洗脫下來(lái)的是大分子，小分子或顆粒會(huì)滯留在孔中，需要長(zhǎng)時(shí)間才能洗脫下來(lái)。

SEC尺寸排阻色譜法原理示意圖

05 Exo-spin™ 色譜柱的樹(shù)脂孔徑是多少?

Exo-spin™ 色譜柱的樹(shù)脂孔徑約為30 nm。
 

06 Exo-spin™ 色譜柱是即用型嗎?

CGS所有的Exo-spin™ 色譜柱都是預(yù)先平衡的，可即時(shí)使用。

07 Exo-spin™色譜柱如何操作?

08 Exo-spin™色譜柱可以重復(fù)使用嗎?

我們不建議重復(fù)使用Exo-spin™色譜柱。
如需要重復(fù)使用，可重復(fù)使用3-5次，但隨著使用次數(shù)增多會(huì)影響提取效率，液體流速可能會(huì)降低。

09 沉淀步驟的建議孵育時(shí)間多長(zhǎng)?

對(duì)于所有類(lèi)型的生物液體(血液除外)，1小時(shí)或過(guò)夜孵育。血液樣本需要至少5分鐘的孵育時(shí)間。

10 使用Exo-spin™柱后，看到柱已經(jīng)改變了顏色。這是正常的嗎?

是的，這是正�，F(xiàn)象，色譜柱顏色的變化是由于蛋白質(zhì)或小分子被滯留在色譜柱中。

11 最后的洗脫液不透明。這是正常的嗎?

是的，最后的洗脫液不必是透明的。

12 如何在細(xì)胞培養(yǎng)基中濃縮外泌體?

2D培養(yǎng)的細(xì)胞上清平均每毫升含1x10⁹個(gè)外泌體。當(dāng)需要處理較大的樣本量時(shí)，在柱純化前使用沉淀劑濃縮外泌體。

13 提取的外泌體怎么保存？

短期保存（一周內(nèi)）置于4℃即可，長(zhǎng)期保存請(qǐng)放置于-80℃。

14 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，如何去除血清來(lái)源的外泌體？

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)必須使用去除外泌體的血清（如去外泌體胎牛血清,Exosome depleted Fetal Bovine Serum, VivaCell P/N: C3801-0050 ）或者無(wú)血清培養(yǎng)基，以降低背景值的干擾（牛血清中含有大量牛源外泌體）。

15 如何鑒定提取的外泌體？

根據(jù)國(guó)際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(huì)發(fā)表的指導(dǎo)手冊(cè)《MISEV 2018》，外泌體特征鑒定通過(guò)NTA測(cè)粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)、WB檢測(cè)標(biāo)志蛋白三項(xiàng)來(lái)驗(yàn)證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度，TEM電子顯微鏡來(lái)觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征，WB檢測(cè)外泌體標(biāo)志蛋白。