分光光度計(jì),又稱光譜儀(spectrometer),是將成分復(fù)雜的光,分解為光譜線的科學(xué)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。
物理意義
當(dāng)一束平行單色光垂直通過(guò)某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí), 其吸光度 A 與吸光物質(zhì)的濃度 c 及吸收層厚度 ι 成正比,而透光度 T 與 c、ι 成反比,即,A = lg(1/T) =k * ι* c → c = A / (k * ι)
這就是光吸收的基本原理Beer-Lambert’s law 比爾—朗伯定律
其中,
• A 為吸光度
• T 為透射比(透光度)是出射光強(qiáng)度(lt)比入射光強(qiáng)度(l0)
• k 為摩爾吸收系數(shù),它與吸收物質(zhì)的性質(zhì)及入射光的波 長(zhǎng) λ 有關(guān)
• c 為吸光物質(zhì)的濃度,單位為 mol/L
• ι為吸收層厚度,一般以 cm 單位
VWR 推出mySPEC 系列多功能分光光度計(jì),適用于微量核酸和蛋白質(zhì)樣本的濃度和純度測(cè)定。
mySPEC Twin 系列具有一個(gè)額外的比色皿端口,可用于測(cè)量細(xì)胞密度或酶活性。預(yù)設(shè)測(cè)定程序,針對(duì)不同應(yīng)用,實(shí)現(xiàn)快速、完整的自動(dòng)數(shù)據(jù)分析。
應(yīng)用包括RNA和DNA的濃度和純度測(cè)定、蛋白質(zhì)測(cè)量(A280,Bradford, Lowry,BCA,Pierce 660 法)、標(biāo)記效率測(cè)定、比色法測(cè)定酶活性和細(xì)胞密度測(cè)量。
工作原理
mySPEC 技術(shù)
通過(guò)靜電形成液柱,起始最長(zhǎng)光程路徑(1 mm)。將下光纖表面移動(dòng)靠近上光纖表面,形成較短光程(最短可達(dá)0.05 mm):通過(guò)靜電拉開(kāi)樣品,然后進(jìn)行擠壓。
1. 使用mySPEC移液器將1 µl樣品直接滴到下光纖表面上
2. 閉合取樣臂
3. 形成樣品液柱,調(diào)節(jié)最佳光程,然后開(kāi)始測(cè)量。由于具有“自動(dòng)開(kāi)始”功能,無(wú)需按“測(cè)量”。幾秒內(nèi)即可顯示測(cè)量結(jié)果,可輕松保存為文檔或進(jìn)行打印
4. 只需簡(jiǎn)單擦拭光纖表面,即可進(jìn)行下一次測(cè)量
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
利用分光光度計(jì)通用mySPEC系列,用戶可以對(duì)極少樣品量中的所含的核酸和蛋白質(zhì)進(jìn)行量。Twin系列擁有額外的比色皿用端口,以便進(jìn)行細(xì)胞密度或酶活性測(cè)量。預(yù)配置模組可對(duì)一系列應(yīng)用進(jìn)行快速、全自動(dòng)數(shù)據(jù)分析,包括RNA和DNA濃度和純度,蛋白測(cè)量(A280, Bradford, Lowry, BCA, Pierce 660),標(biāo)簽效率測(cè)定,酶活性比色測(cè)定和細(xì)胞密度測(cè)量。
• 只需1 µl樣品
• 操作簡(jiǎn)單,無(wú)需比色皿,只需移液器即可測(cè)量(<5秒),然后擦掉
• 測(cè)量范圍從2 ng/µl到15 µg/µl(ds DNA),避免易于出錯(cuò)的稀釋和計(jì)算
• Twin系列結(jié)合微量和比色皿功能,可對(duì)樣品進(jìn)行溫度控制(30-40 °C)和攪拌
(0/50/1000每分鐘)
• 獨(dú)立式8.4英寸觸摸屏版本可選
• 用戶定義純度設(shè)置后可自動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析
最小加樣量
mySPEC 超微量紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)可用于微量體積的濃度和純度測(cè)定,針對(duì)不同樣品,其最小加樣量不同。
核酸:1 μl
高濃度核酸:1,3 - 2 μl
蛋白:2 μl
Bradford、BCA、Lowry或Protein Pierce 660 nm試劑:2 μl
微生物細(xì)胞懸浮液:2 μl
測(cè)試結(jié)果對(duì)比
我們采用mySPEC和某品牌的同類產(chǎn)品對(duì)6份不同濃度的dsDNA樣品進(jìn)行了測(cè)定,得到以下數(shù)據(jù),
通過(guò)對(duì)比后我們發(fā)現(xiàn):
• 兩種儀器的測(cè)量結(jié)果相同
• mySPEC的測(cè)量結(jié)果具有更為出色的再現(xiàn)性(標(biāo)準(zhǔn)偏差。
結(jié)果表明:mySPEC的測(cè)量精確度更高。如此看來(lái),這款分光光度計(jì)真的很skr!
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