細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低！
具有細(xì)胞毒性！
實(shí)驗(yàn)條件摸索難，重復(fù)性不佳！
如果您使用的是化學(xué)法細(xì)胞轉(zhuǎn)染，一定不要錯(cuò)過本次分享。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染 是指將外源基因如 DNA，RNA 等導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制細(xì)胞基因功能、實(shí)現(xiàn)基因調(diào)控的常規(guī)工具。市場上各種轉(zhuǎn)染試劑琳瑯滿目，各有千秋，然而沒有任何一種轉(zhuǎn)染試劑可以能夠適用于所有細(xì)胞種類、滿足所有實(shí)驗(yàn)需求和目的，成分控認(rèn)為轉(zhuǎn)染試劑的成分及作用機(jī)理對轉(zhuǎn)染效果及細(xì)胞生理作用影響顯著，是轉(zhuǎn)染試劑選擇的重要依據(jù)，選試劑時(shí)要留意成分哦。



嚴(yán)格來講，轉(zhuǎn)染的方法可以基于化學(xué)法、物理法（電穿孔、顯微注射等）以及病毒介導(dǎo)法，沒有一種方法是放之四海而皆準(zhǔn)。作為成分控的小編，本次主要為大家介紹基于各類轉(zhuǎn)染試劑的化學(xué)法轉(zhuǎn)染。

• 基于磷酸鈣成分的轉(zhuǎn)染試劑，其主要作用原理是與 DNA 通過沉淀反應(yīng)形成磷酸鈣-DNA 復(fù)合物，粘附到細(xì)胞膜表面，借助內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。pH 值，鈣離子濃度，DNA 濃度，沉淀時(shí)間，細(xì)胞孵育時(shí)間乃至各組分加入順序都可能對結(jié)果產(chǎn)生影響，因此實(shí)驗(yàn)條件摸索和優(yōu)化時(shí)間較長，且重復(fù)性不佳。

• 基于脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染試劑包括中性脂質(zhì)體和陽離子脂質(zhì)體兩種。中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹 DNA，借助脂質(zhì)膜將 DNA 導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。目前應(yīng)用比較廣泛的是帶正電的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，DNA 并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電 的 DNA 自動(dòng)結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成 DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。此方法操作簡單，重復(fù)性好，在體外轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但具有一定的細(xì)胞毒性，可能會(huì)干擾細(xì)胞的代謝。且活性受血清影響，需要去除血清。

• 基于陽離子聚合物的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。其又分為樹枝狀陽離子聚合物和線性陽離子聚合物兩類，前者細(xì)胞毒性相對較大，后者細(xì)胞毒性較小，但其轉(zhuǎn)染效率都高于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，適用也較為廣范。

• 以上單一成分的轉(zhuǎn)染試劑或聚焦于提高效率或著重于降低細(xì)胞毒性，可謂魚和熊掌不可兼得也。

新一代轉(zhuǎn)染試劑，不局限于單一成分，混合了不同專利配方的脂類（非脂質(zhì)體）、加上蛋白質(zhì)組分、以及各種的專利成分，兼具了轉(zhuǎn)染效率高和細(xì)胞毒性小的優(yōu)勢，且操作更加簡單，易于高通量

羅氏 X-TremeGENE 便是新一代轉(zhuǎn)染試劑的佼佼者，升級版的多組分混合試劑，兼具極高轉(zhuǎn)染效率和極低細(xì)胞毒性，在超過 350 株真核細(xì)胞株中獲得了高效轉(zhuǎn)染的驗(yàn)證，尤其針對難轉(zhuǎn)染細(xì)胞株亦有出色表現(xiàn)。
 

圖 1. 兩種試劑對 CHO-K1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染帶 GFP 標(biāo)記的質(zhì)粒，A 和 C 是轉(zhuǎn)染后熒光顯微圖，B 和 D 是明場顯微圖. 與競爭產(chǎn)品比較，X-tremeGENE HP 表現(xiàn)出更優(yōu)的轉(zhuǎn)染效率更低的細(xì)胞毒性

圖 2. 不同試劑在含血清的培養(yǎng)基中對四種很難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株進(jìn)行轉(zhuǎn)染，X-tremeGENE HP 試劑遠(yuǎn)優(yōu)于其他試劑

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