美國(guó)BIOLOG公司獨(dú)家研發(fā)的產(chǎn)品ECO板,特別為微生物群落分析和生態(tài)研究設(shè)計(jì),Eco板上包含國(guó)際土壤微生物學(xué)家精選的用于微生物群落分析最常用的31種碳源,是國(guó)際上微生物生態(tài)功能多樣性研究的最典型和最權(quán)威方法之一。
每塊96孔ECO板上有3組平行,每組31種碳源,3個(gè)陰性對(duì)照,加入同一樣品后,可以獲得3組平行數(shù)據(jù)。微生物群落對(duì)這31種碳源的特征性利用稱作該微生物群落的代謝指紋圖譜。從單個(gè)的微平板上的指紋圖譜就可以獲得大量的代謝信息?捎糜诩兎N及混合菌群(如土壤樣品)微生物功能多樣性研究。
31種碳源可分為六大類,具體如下:
單糖\糖苷\(chéng)聚合糖類
B2, D-木糖
H1, a-D-乳糖
A2, ß-甲基D-葡萄糖苷
G2,葡萄糖-1-磷酸鹽
E1, a-環(huán)狀糊精
F1, 肝糖
G1, D-纖維二糖
氨基酸類,
A4,L-精氨酸,
B4,L-天冬酰胺酸
C4 L-苯基丙氨酸
D4, L-絲氨酸
E4,L-蘇氨酸
F4,甘氨酰-L-谷氨酸
酯類
B1, 丙酮酸甲酯
C1, 吐溫40
D1, 吐溫80
A3, D-半乳糖酸γ內(nèi)酯
醇類
C2, I-赤藻糖醇
D2, D-甘露醇
H2, D,L-a-甘油
胺類
G4, 苯乙基胺
H4, 腐胺
E2, N-乙;-D-葡萄胺
酸類
B3,D-半乳糖醛酸
F2 D-氨基葡萄糖酸
C3, 2-羥苯甲酸
D3, 4-羥基苯甲酸
E3,r-羥基丁酸
F3, 衣康酸
G3,a-丁酮酸
H3, D-蘋果酸
樣品簡(jiǎn)單處理后(過(guò)濾或離心),取上清液加到ECO板上培養(yǎng)多至5天時(shí)間,每隔一定時(shí)間用酶標(biāo)儀在590nm和750nm下測(cè)定OD值,OD值的大小反應(yīng)樣品微生物利用某一碳源底物的能力,將OD值導(dǎo)出后進(jìn)行分析,如AWCD值(平均吸光度)、豐富度、單孔的動(dòng)力學(xué)分析、不同類碳源的比較等,并可用聚類軟件對(duì)不同樣品進(jìn)行聚類分析。
值得一提的是ECO板不僅測(cè)定可培養(yǎng)微生物,還可測(cè)定部分不可培養(yǎng)微生物,只要微生物能利用碳源進(jìn)行代謝(并不增殖),ECO板上顯色體系均可檢測(cè)出來(lái)。
最常見(jiàn)的應(yīng)用是利用ECO板分析環(huán)境因素、根系、葉面、肥料、農(nóng)藥對(duì)土壤微生物菌群的生態(tài)功能多樣性的影響,比較不同樣品間或同一樣品不同時(shí)間的功能多樣性差異,比較環(huán)境修復(fù)前后微生物群落的功能多樣性差異,等等。
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